HPLC法测定射干中射干苷的含量
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摘要：目的：用HPLC法测定射干中射干苷的含量。方法：采用Agilent1100高效液相色谱仪，在流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(30∶70)，流速1.0mL•min-1，检测波长266nm，柱温25℃，用外标法定量，测定射干中射干苷的含量。结果：射干苷在0.22～1.1μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=6485.5X+82.95(r=0.9998),平均回收率为97.66%，重现性RSD2.30%为(n=5)。结论：本方法简便、准确、可靠，灵敏度、重现性均良好，为评价射干质量提供一个可靠测定方法。
关键词：HPLC；射干苷；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0782-02
射干为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis (L) DC.的干燥根茎，主产于湖北，河南，江苏，安徽等地，是常用中药，近几版《中国药典》均有收载。其味苦，寒，入肝，肺经。具有清热解毒、利咽消痰、散血消肿之功效。为治疗喉痹咽痛之要药。主治咽喉痰患的方剂多以射干为君药组方，有较好疗效。现代研究表明，射干含有丰富的异黄酮类化合物[1]，具有明显的抗炎及抗病毒作用[2]。射干苷[3]tectoridin 为其中的一个主要有效成分，其紫外吸收强，干扰小，可用作射干药材及其制品的质量控制指标。
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1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪(美国惠普)，TCQ-250超声仪(北京医疗设备二厂)，ANDFR-200电子分析天平(日本)。射干苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111632-200501)。射干饮片(辽宁省众意愿大药房购，经辽宁中医药大学药学院中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为鸢尾科射干属植物Belamcanda chinensis (L) DC.的干燥根茎)，甲醇为色谱级，其他试剂均为分析级。
2实验条件
2.1色谱条件色谱柱：AgilentC18(4.6mm×150mm,5μm)，流动相：甲醇-0.1%冰醋酸溶液(30∶70)[5]，流速1.0mL•min-1，检测波长266nm，柱温25℃。
2.2波长确定经全波长紫外扫描分析射干苷对照品和样品中所测成分相应吸收峰，结果紫外光谱均在266nm处有最大吸收。
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3实验方法
3.1标准品溶液的制备精密称定射干苷对照品10.96mg置100mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
3.2供试品溶液的制备取射干饮片研细，精密称定为1.0682g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL，超声处理60min，放冷，滤过。滤液转移至50mL容量瓶中，以甲醇续补至刻度，摇匀，取上述溶液5mL置10mL容量瓶加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
3.3线性关系考察精密量取射干苷对照品10.96mg置100mL容量瓶，加甲醇使溶解并稀释至刻度。取上述射干苷对照品溶液2，4，6，8，10μL分别注入高效液相色谱仪，得射干苷的标准曲线方程为Y=6485.5X+82.95，r=0.9998。结果提示，射干苷在0.22～1.1μg范围内呈良好的线性关系。
3.4精密度实验精密吸取3.2项下供试品溶液5μL，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定射干苷峰面积, RSD为0.1% ,说明精密度良好。
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3.5稳定性实验取3.2项下供试品溶液5μL，分别在0，2，4，8，12，24h进样测定,测定射干苷峰面积，RSD为0.5%，表明样品溶液在48h内稳定。
3.6重现性实验取同一批射干药材，按3.2项下制备6份供试品溶液，分别进样5μL，测定射干苷的含量RSD为2.3%，表明该方法重现性较好。
3.7加样回收率实验精密吸取已知射干苷含量的射干供试品5份，分别加入射干苷对照品，按3.2项下制备，进样5μL；计算平均回收率为97.66%，RSD为1.16%。见表1。
4讨论
甲醇超声提取法[5]操作简便，准确，回收率高，提取充分，故本实验只选择甲醇超声法提取药材。
目前市售射干药材[6]常混有川射干Iris tectorum Maxim，扁竹根[7]Iris japonica Thunb，白射干[8]Iris dichotoma Pall等。本实验所用射干药材经辽宁中医药大学药学院中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为鸢尾科射干属植物Belamcanda chinensis (L) DC.的干燥根茎，药材的选用符合药典2005版射干项下规定。
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2005版药典射干项下含量测定是对次野鸢尾黄素进行的HPLC法测定，在本实验色谱条件下次野鸢尾黄素不干扰射干苷的含量测定。选择射干苷作为指标性成分，制定含量测定方法，为全面控制射干药材及其制剂的质量提供更多的科学依据。
参考文献
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