HPLC法测定蒙药五味清浊散中胡椒碱的含量
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摘要：目的：建立蒙药五味清浊散中胡椒碱的高效液相含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，用C18色谱柱(150mm×4.6mm),以甲醇-水(77∶23)为流动相，流速为0.6mL/min，检测波长为343nm，定量法为外标法。结果：胡椒碱的线性范围为0.0345～0.0805μg(r=0.9998)，平均加样回收率为99.50%,RSD=1.09%。结论：该方法灵敏、准确、重复性好，可用于蒙药五味清浊散的质量控制指标。
关键词：高效液相色谱法；五味清浊散；胡椒碱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0865-02
蒙药五味清浊散由石榴、豆蔻、荜茇、红花和肉桂等5味药材组成，具有暖胃消食，清糟归精等功效，临床上主要用于食欲不振、消化不良、胃脘冷痛、满闷嗳气等病症[1]，是蒙医临床上常用传统制剂之一，被收载于《中国药典》。为建立该制剂含量测定方法，本文采用反相高效液相色谱法对蒙药5味清浊散中荜茇所含有效成分胡椒碱进行含量测定[2]，为蒙药五味清浊散的质量标准制定和进一步开发研究奠定了良好的基础。
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1仪器与试剂试药
高效液相色谱仪(日本岛津)LC-10ATVP泵，SPD-10AVP检测器，浙江大学N-3000色谱工作站；KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；BS210S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；甲醇为色谱纯，水为亚沸蒸馏水，其他试剂均为分析纯；胡椒碱对照品(批号：0775-9702)由中国药品生物制品检定所提供；供试品五味清浊散(批号：20070211、20070317、20070423)由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供。
2色谱条件
色谱柱:采用C18柱(150mm×4.6mm)；以甲醇-水(77∶23)为流动相；柱温:室温；检测波长：343nm；流速：0.6mL/min；定量法为外标法。
3试验溶液的制备
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3.1供试品溶液的制备称取各批号五味清浊散约0.7g，精密称定(n=3)，分别置50mL具塞3瓶中，加甲醇50mL，超声40min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，精密吸取滤液2mL置10mL棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3.2对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品4.6mg，置10mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取1mL用甲醇稀释并定容至100mL，制成每1mL含4.6μg胡椒碱的对照品溶液。
3.3阴性溶液的制备按处方量比例称取各味药(缺荜茇)制得空白样品，照供试品溶液制备方法制得空白(阴性)溶液。
4干扰试验
供试品溶液、阴性溶液和对照品溶液在上述色谱条件下进样10.0μL,结果见图1～3。由图谱可知样品中胡椒碱与其他组分可达基线分离，阴性溶液无干扰。
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5方法学考察
5.1线性关系考察精密吸取已制备的对照品溶液7.5、10、12.5、15、17.5μL进样，按上述色谱条件测定，以外标法峰面积定量，峰面积值Y为纵坐标，进样量X(μg)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=17221+6822669C，r=0.9998；结果表明，胡椒碱进样量在0.0345～0.0805μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。标准曲线见图4。
5.2精密度试验精密吸取对照品溶液及样品溶液各10.0μL，分别进样，重复5次测定峰面积，结果对照品RSD为1.25%，供试品RSD为0.83%。
5.3稳定性试验精密吸取同一批号(20050317)的供试品溶液10.0μL，每隔2h在上述色谱条件下连续进样5次，结果胡椒碱在8h内峰面积值基本一致，测得峰面积平均值为408061，RSD为0.92%。
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5.4重复性试验精密吸取同一批号(20050317)供试品溶液10.0μL，各5份，分别按含量测定项下方法操作，并测得胡椒碱的含量，其结果RSD为0.87%。
5.5加样回收试验称取已知含量的供试品(n=5，批号：20050317)约0.37g，精密称定，分别依次加入适量对照品并置于具塞三角瓶中，再精密加入甲醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声40min，放置室温，称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀后过滤，精密吸取滤液2.5mL置10mL棕色容量瓶中加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。按样品处理方法处理后进样10.0μL测定，计算胡椒碱回收率，结果见表1。
6供试品的含量测定
分别精密吸取供试品溶液10.0μL，在上述色谱条件下测定峰面积，计算含量，结果见表2。
7讨论
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蒙药五味清浊散由石榴、豆蔻、荜茇、红花和肉桂等5味药材组成，荜茇为该复方制剂中的主药之一，胡椒碱为其主要活性成分。为提高药品质量、确保临床疗效，笔者采用高效液相色谱法对蒙药五味清浊散中荜茇所含胡椒碱进行了含量测定，为蒙药五味清浊散的质量标准奠定了良好的基础。此外本实验用甲醇提取纯化样品，能使样品中的胡椒碱得到良好的分离，此方法简便、易于操作，为其他含荜茇蒙成药的质量分析提供了一种准确可靠的方法。
参考文献
[1]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准[S].呼和浩特：内蒙古科学技术出版社，1984：78.
[2]国家药典委员会.中国药典(2005版一部)[S].北京:化学工业出版社,2005：163，366., http://www.100md.com(包同力嘎 包桂花 阿拉腾花)