滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮肾炎血清诱导肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原核酸表达的影响(2)
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2方 法
2.1 正常人GMC培养
将GMC离心，加15% FCS RPMI 1640培养液及0.66U/mL RI后加入细胞培养瓶，CO2恒温培养箱培养。细胞融合80%以上时，0.25%胰酶消化、传代。
2.2 大鼠含药血清制备
清洁级SD大鼠10只，体重(200±20)g，按简单随机化原则分为2组。A、B组分别以滋肾解毒中药浓缩液、饮用水各1.875mL/100g灌胃，日1次，共14天。乙醚吸入麻醉，腹主静脉无菌取血。分离血清，备用[1]。
2.3 GMC中纤维连接蛋白(FN)mRNA表达的检测
2.3.1 GMC细胞总RNA的提取
取传代至足够数量的GMC，用胰蛋白酶消化计数，铺于96孔板(每孔4000个)，加入15%FCS1640液；待细胞贴壁48h后，换无血清培养液同步24h；换5%FCS1640液于96孔板，在加入刺激物时分为5组：1组(空白对照组) 、2组(B组大鼠血清+15%LN血清)、3、4、5组分别为A组低、中、高浓度含药血清+15%LN血清。
收集12、24、36、48h培养的GMC，每组分别3复孔。细胞总RNA的提取：胰酶消化细胞，PBS洗3次后转入1.5mL灭菌离心管；在标本中加入1mL的Trizol ......
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