小型猪慢性心肌缺血模型四诊信息采集的方法探索(1)
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摘要：目的：探讨中华实验小型猪慢性心肌缺血模型构建方法以及探讨其四诊信息采集方法。方法：采用中国农业大学育种健康中华小型猪，体重(25±4)kg，月龄6-10个月，雌雄不限，动物在麻醉、无菌条件下开胸，分离前降支，在第一对角支远端的前降支主干放置Amemid缩窄环，关胸。并通过心电图、超声心动图及冠脉造影评价小型猪慢性心肌缺血模型构建成功与否。在造模过程中，参照中医的四诊信息采集办法，并参考中兽医在大动物辨证方面的经验，制定出小型猪证候观察量表，在实际操作中通过望、闻、问、切四诊方法对模型动物宏观体征进行动态观察，并借助心电图、数码照相等现代手段间接地获得四诊信息。结果：模型动物在冠脉环缩术后1-8周内，精神状态、舌象、饮食、饮水等方面均有明显变化。数码相机所拍舌象经Adobe Photoshop 8.0分析所得R、G、B值与假手术组相比有显著性差异。结论：对小型猪的四诊信息采集是可行的、客观的，但更需不断发掘、完善，制定出量化标准。
关键词：小型猪；慢性心肌缺血模型；四诊信息
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中图分类号：R2-03；R-33 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)07-1438-03
证和辨证论治是中医理论与实践的特色和优势，揭示其复杂的内在规律，发展辨证论治的理论与实践，需要进行大量动物实验。与人类类似，疾病造模动物在疾病发展过程中也存在证候的变化，以往证候动物实验研究往往采用创伤性检测、实验室生化和病理指标检测，对四诊宏观体征的观察却甚少，而四诊信息又是中医进行辨证论治的主要依据，因此，对模型动物四诊信息的采集及解读是运用动物模型研究中医证候面临的首要问题。本文以中华实验小型猪作为试验动物，探讨小型猪心肌缺血模型的构建及其四诊信息采集方法。为制定小型猪心肌缺血模型四诊采集标准和辨证标准提供理论依据。
1 小型猪心肌缺血模型的构建及评价方法
目前最常用的制备方法是将Ameroid缩窄环套于冠状动脉血管外，以逐渐闭塞该血管。具体方法为：选取小型猪，体重(25±5)kg，雌雄不限。实验猪术前禁食24h，适度饮水。氯胺酮25mg/kg肌注诱导麻醉，并建立耳缘静脉通路维持。行气管插管，成功后接麻醉机辅助呼吸。潮气量12mL/kg(300mL)，呼吸频率14次/min，呼吸比1：2，氧浓度200-400mL，描记肢导及胸导心电图、并行心脏超声检查。动物右侧卧位，无菌条件下，左第3肋间开胸，切开心包，充分暴露手术野。于左冠状动脉前降支第一间隔支起始部远端钝性分离冠状动脉约4-6mm，穿引导线，置放Ameroid缩窄环并确定其固定良好。缝合心包，依次关胸。术中心电监测，术后即刻描记心电图。动物恢复血压呼吸后，拔除气管插管，动物入笼。于麻醉苏醒期进行监控，肌肉注射青霉素480万u，日1次，共3日。
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判断心肌缺血模型建立成功的标准：满足下列3项条件中两项或以上者，可以认为模型建立成功：(1)心电图出现I、AVL和(或)Ⅱ、Ⅲ、AVF和(或)V4-V6导联ST段压低和(或)T波改变(由直立变为倒置或倒置变为直立)；(2)冠状动脉造影提示左旋支次全闭塞或完全闭塞(狭窄程度>95%)；(3)心脏超声检查表现为缺血引起的明显的心肌节段性室壁结构改变和运动功能减低。此实验中的动物在术后4周行心电图、冠脉造影和超声心动检测，均符合以上标准，在构建模型的过程中，对动物进行动态观察，收集其四诊信息。
2 四诊信息采集的方法探讨
小型猪的个体大，难驾驭，在宏观体征观察中有很大难度，笔者及其所在团队参照中医的四诊信息采集办法，并参考中兽医在大动物辨证方面的经验，在实验初期制定了小型猪部分证候的观察量表。并在实际操作中进行充实、完善。现将主要内容介绍如下。
, 百拇医药 2.1 望诊
2.1.1 望神 即观察动物在自然状况下的精神意识、形体动作、何对外界的反应等各个方面。观察中尽量避免惊扰动物，通过实验人员的观察，参照表1，评定动物的精神状态。
2.1.2 望色 即通过观察小型猪被毛、口唇、鼻盘、眼睛、耳部等部位的色泽变化，来了解动物模型证候的发展变化。笔者所采用的观察方法为：动物保持清醒，人工保定后，肉眼观察各部位色泽的变化，同时用数码相机拍照，采用casmatch色卡校正，并经Adobe Photoshop 8.0分析得到R、G、B值。
2.1.3 望舌 舌与脏腑经络有着密切的联系。舌为心之苗，通过望舌色，可以了解气血运行情况，从而反映“心主血脉”的功能。因此，在心肌缺血动物模型的四诊信息采集上，望舌是重中之重，它对证候的诊断和评价都有着举足轻重的意义。因此，在动态观察上，笔者及其团队对舌象的观察和采集也非常重视，尝试并摸索出了一套方法。先通过肉眼观察，参照表2进行评定。由于人为因素干扰较大，笔者又采取数码相机拍照舌象，再通过专业软件进行分析以达到客观化。具体方法是：动物在清醒状态下，人工保定，待动物稳定后，一人用开口器打开猪嘴，暴露舌部，另一人用数码相机拍照记录，并采用easmateh色卡进行校正。需要注意的是：拍照时尽量要统一光源，并使色卡与舌面保持在同一平面上。得到的照片经Adobe Photoshop 8.0分析得到R、G、B值。
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2.2 闻诊
在动物观察过程中，通过听动物发出的声音、嗅其发出的异常气味、排出物的气味及所在环境的气味来诊察动物的状况。同时可以借助听诊器检查动物的心脏情况。
2.3 问诊
由于动物无法与人类交流，故对动物的问诊采集是不可行的，但可以通过询问饲养员获得动物近期的精神状况、进食、进水、二便等信息。
2.4 切诊
2.4.1 脉诊 对于脉象的研究，由于小型主动脉表面肌层丰富，难以触及，故采用心电图的动态观察来表示脉象能提示的部分信息。
2.4.2 体温 在中医诊断学中，体温寒热属于问诊范围，但对于动物模型上，笔者认为应该属于切诊范围，具体测定方法为：动物清醒状况下，人工保定后。将温度计插入肛门，保留5min，测定肛温。
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3 小型猪心肌缺血模型四诊观察结果
3.1 宏观体征观察
动物模型在复制过程中可以获得的四诊信息有：
(1)造模后的第1周，动物精神不振，喜卧懒动，行动缓慢，抓取时反抗不剧烈，叫声不洪亮，采进食、饮水量少，鼻黏膜苍白，鼻盘干燥少津，被毛少泽，耳温凉，大便干结或便溏。
(2)第2周，动物精神正常，活动自如，采进食、饮水量有所增加，鼻黏膜色泽较第一周红润，鼻盘略湿润，被毛少泽，大便趋于正常。
(3)第3-6周，动物出现精神紧张、易激惹，皮毛竖立，警惕性高，怕人，不易接近，抓取时反抗剧烈，不配合，叫, 百拇医药(刘 蕾等)