中药蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖影响的实验研究(2)
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1.2 方法
1.2.1蛇六谷不同提取物的制备和配置 参考文献方法[3]，精密称取干燥的蛇六谷饮片200g，粉碎成粗颗粒， 95%乙醇浸泡过夜后回流提取。提取液减压浓缩，回收乙醇后依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收各萃取试剂后得不同萃取物。醇提取后药渣以水煎煮提取。诸提取成分过滤除菌，浓缩至浸膏，按不同极性得到蛇六谷的不同提取物。临用时分别精密称取各提取物各2mg，溶解于200μL二甲基亚砜中，旋涡震荡，待全部溶解后，加入800μL RPMI-1640培养液，旋涡震荡，充分混匀后置于4℃冰箱保存备用，其终浓度均为2mg/mL。
1.2.2 MTT[4]法检测蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制率 取对数生长期细胞，以RPMI-1640培养液稀释至浓度约1×104/mL，接种于96孔板，每孔200μL。常规培养24h后，分别加入5、10、15、20μL各提取物，同时设溶剂空白对照组和5-Fu阳性对照组，每浓度设4复孔，于37℃饱和湿度、5%CO2培养箱中继续培养48h后，每孔加入MTT溶液20μL(5mg/mL)，震荡混匀后，继续孵育4h。吸去上清，每孔加入200μL二甲基亚砜，轻轻振荡，约1h后，用酶标仪在570nm波长处测其吸光度值(OD值)，计算细胞抑制率。按下列公式计算细胞抑制率：细胞抑制率=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%。剂量和效应关系用直线回归分析求半抑制率(IC50) ......
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