龙甘胃舒分散片溶出度测定研究
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摘要：目的：建立龙甘胃舒分散片溶出度的测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以龙胆苦苷为指标，测定龙甘胃舒分散片在不同介质及不同溶出时间点的溶出度。结果：采用桨法测定，以水100mL为溶出介质。转速为100r/min。以龙胆苦苷为对照品计算累积溶出率，龙胆苦苷在16.2～324μg/mL的范围内，浓度与其峰面积呈良好线性关系，平均回收率99.92%，RSD=1.92%，溶出度测定结果显示45min时均大于80%。结论：该溶出度测定法稳定，结果可靠。
关键词：龙甘胃舒分散片；溶出度；HPLC；龙胆苦苷
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2009)0501-11-02
溶出度检测是评价制剂处方、生产工艺及制剂生物利用度的重要指标，该项检测在化学药及生物制剂中已较普遍应用。由于中药成分的复杂性和基础研究较薄弱，历届中国药典中药品种中均未收载溶出度测定方法。近年来随着制药技术和分析手段的不断发展，以及速释和缓释等新剂型在中药中的运用，在一些组方较简单的中药新剂型中也尝试着将溶出度测定纳入标准。
龙甘胃舒分散片系由民间验方按中药新药研究技术要求研制而成的中药成方制剂，由龙胆草、甘草、大黄、香附(炒)、陈皮等中药组成。临床用于治疗中医证型中的胃热炽盛证和肝气犯胃证胃病。为了更好的规范该分散片的质量标准，以达到质量稳定、可控，确保临床疗效的目的，对其溶出度测定方法进行了研究。由于方中以龙胆草为君药，且其主要成分龙胆苦苷具有保肝、健胃和抗菌消炎等药理作用，因此溶出度测定方法研究中，以龙胆苦苷为指标，对其溶出度测定方法进行考察。
1 仪器与试药
1.1 仪器
FIP-1100高效液相色谱仪(美国：包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315B二极管阵列检测器、HP化学工作站)；SimplieityTM个人型超纯水系统(Millipore公司)，cQ-250超声波清洗仪(上海船舶电子设备研究所)，AG-135电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，RC-6溶出度测定仪(天津市新天光分析仪器技术有限公司)。
1.2 试药
龙胆苦苷对照品(含量测定用，批号：0770-200106，中国药品与生物制品检定所)；磷酸二氢钾(广东省化学试剂工程技术研究开发中心，分析纯，批号：20040908)；氢氧化钠(上海化学试剂有限公司，分析纯，批号：20040812)；盐酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20050803)：甲醇(上海振兴化工一厂，分析纯，批号：200702003)，乙腈(韩国SK化学试剂有限公司，色谱纯，批号：10071743)。
龙甘胃舒分散片：自制，批号：070801、070802、070803。
2 方法与结果
2.1 含量测定方法的建立
2.1.1 色谱条件 参照文献[4～5]中龙胆苦苷的含量测定方法，分别比较了不同色谱柱及不同流动相的分离效果。确定色谱条件为：色谱柱：Dikma Hypersil c18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：乙腈-水(13:87)，流速：1mL/min，检测波长：270nm，柱温：室温，理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。
2.1.2 线性关系的考察 精密称取龙胆苦苷对照品20.25mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀(每1mL含龙胆苦苷810.0μg)。精密吸取适量，加甲醇稀释至以下浓度：324、162、129，6、81、32，4、16，2μg/mL，精密吸取各浓度对照品溶液10μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品峰面积，将对照品浓度与对照品峰面积进行回归处理，得回归方程为A=11.452C-18.807(r=0.9999)，表明龙胆苦苷对照品浓度在16.2～324μg/mL范围内与对照品峰面积呈良好的线性关系。
2.1.3 精密度试验 精密吸取同一溶出度溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样6次，测定供试品溶液中龙胆苦苷峰面积值，经计算RSD为1.29%。
2.1.4 稳定性试验 精密吸取同一溶出度溶液10μL，按上述色谱条件，每隔一定时间进样，共测定8h，测定供试品溶液中龙胆苦苷峰面积值，经计算RSD为1.42%，表明：供试品溶液在8h内基本稳定。
2.1.5 重复性试验 取本品6份，按溶出度供试品溶液制备法制备，照上述色谱条件测定，结果RSD为1.86%(n=6)，表明本方法重复性良好。
2.1.6 加样回收率试验 取本品适量，研细，称取约0.25g共6份，精密称定，分别置于25mL量瓶中，各精密加入龙胆苦苷对照品溶液(0.405mg/mL)1mL，混匀，加甲醇至近刻度，超声提取30min，放冷，加甲醇补足至刻度，摇匀，滤过，吸取适量续滤液通过微孔滤膜(0.45μm)，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。计算回收率，结果见表1。平均回收率为99.92%，RSD=1.92%
2.2 溶出实验条件的确定
2.2.1 溶出介质的选择取本品2片共9份，分别精密称定重量，选用水、0.1mol/L盐酸溶液、pH=6.8磷酸盐缓冲液各100mL为溶出介质，每种介质取3份样品进行平行试验，采用转速为100r/min，按照2005年版《中华人民共和国药典》二部溶出度桨法下方法操作，经45min，取样5mL。经0.45μm微孔滤膜滤过，吸取续滤液，作供试品溶液。照上述色谱条件分别测定各供试品溶液的峰面积值，计算溶出度，结果在水、0.1mol/L盐酸、pH6.8磷酸盐缓冲液不同介质中的溶出度(n=3)分别为79.05%、73.21%、77.78%。结果显示：以水为溶出介质其溶出效果最好，且便于操作，故以水为介质。
2.2.2 溶出时间及溶出方法的选择 分别照溶出度测定法中的桨法和篮法，以水100mL为溶出介质，转速为100r/min，取本品2片共6份，依法操作，经5、10、15、30、45、60min，分别取溶液5mL(并及时在操作容器中补充相同体积的同温介质)，滤过，取续滤液作为供试品溶液；照上述测定方法操作，测定、计算每片在相应时间点的溶出度，结果见表2。
表2结果显示：桨法测得数据较篮法更均匀稳定，且30min溶出度均达到最高，因此选用桨法较宜，且考察30min ......
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