桃核承气改良方对家兔血管内皮损伤后STAT3和VEGF影响的实验研究(1)
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摘要：目的：研究中药桃核承气改良方对家兔血管内皮损伤后sTAT3(信号转导和转录活化因子)和VEGF(血管内皮生长因子)的影响。方法：健康新西兰大耳白兔40只，体重2～2.5kg，雌雄不拘。将动物分模型组(n=10)、中药组(n=10)、西药组(n=10)、空白组(n=10)，模型组、中药组、西药组高酯饲料喂养4周后行腹主动脉内膜剥脱术遣模。术后模型组、中药组、西药组正常饲料喂养，中药组予桃核承气改良方灌胃4周，西药组予舒降之、阿司匹林灌胃4周，模型组、空白组予生理盐水灌胃4周。采用半定量RT～PCR法测定血管中STAT3mRNA半定量和VEGF mRNA半定量。结果：模型组STAT3和VEGF mRNA半定量较空白组明显升高(P<0.05)；西药组STAT3和VEGFmRNA半定量较模型组明显降低(P<0.05)；中药组STAT3和VEGFmRNA半定量较模型组明显降低(P<0.05)，中药组与西药组之间无明显差异(P>0.05)。结论：桃核承气改良方能防治血管内皮增生从而预防冠心病经皮冠状动脉介入治疗技术后冠脉再狭窄。
关键词：桃核承气改良方；血管内膜剥脱术；血管内皮；STA13；VEGF
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2009)05-1022-04
冠心病是危害人类生命的最主要疾病之一。目前心血管领域积极开展了介入治疗，以经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous translumlnal coronary angiplasty，PTCA)为基础的冠心病经皮冠状动脉介入治疗技术(percutaneous coronary intervention，PCI)迅速发展，成为冠心病血管重建治疗的较成熟的手段，成功抢救许多患者生命。介入治疗后冠脉再狭窄(restenosls，RS)率已经从PTCA时代的20%～30%降至目前药物支架时代的5%～8%，但是Rs仍是影响介入治疗中、远期疗效的重要因素。目前常规西药防治过程中出现对肝功、肾功损害及大出血等的严重问题仍未能解决，因此PCI术后RS的中医药防治的研究成了人们关注的新热点。本文旨在研究中药桃核承气改良方对血管内皮损伤后sTAT3(信号转导和转录活化因子)的影响来预防PCI术后RS。
1 材料与方法
1.1 实验动物及饲料
健康新西兰大耳白兔40只，体重2～2.5kg雌雄不拘。由辽宁中医药大学实验动物中心提供。家兔普通饲料、家兔高脂饲料(基础饲料79%、蛋黄粉15%、猪油5%、胆固醇1%)均由辽宁中医药大学动物实验中心加工。
1.2 主要试剂和仪器
鼠抗人单克隆抗体COX-2(GT201202)，购自Gene公司。封闭用正常山羊血清工作液，总RNA提取试剂异硫氰酸胍(Tfiozol Reagent)：美国Invitrogen Life technologies公司。反转录酶(AMV)，RNA酶抑制剂，dNTP混合液，Oligo(dT)15，TaqDNA聚合酶，目的基因引物均购自日本TaKa-Ra公司。考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒：南京建成生物工程公司。碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG，北京中山生物技术有限公司。PCR扩增仪(德国Biometra)，Chemi Imager5500凝胶电泳成像分析系统(美国Mphainnoteeh chemi Ima-ger)。恒温水浴箱、SmartView2001生物电泳图像分析软件等。
1.3 实验方法
1.3.1 实验分组 健康新西兰大耳白兔40只，将动物分模型组(n=10)、中药组(n=10)、西药组(n=10)、空白组(n=10)，将模型组、中药组、西药组高脂饲料喂养4周后行腹主动脉内膜剥脱术造模。术后3组正常饲料喂养，中药组予桃核承气改良方4.5mL/kg灌胃4周，西药组予舒降之、阿司匹林混合液4.5mL/kg灌胃4周，模型组、空白组予生理盐水4.5mL/kg灌胃4周(给药量按人和动物间体表面积折算的等效剂量比率表计算)。
1.3.2 药物制备 中药：桃核承气改良方(大黄30g，芒硝15g，甘草15g，肉桂15g，桃仁15g，水蛭25g，金银花20g)，由辽宁中医药大学附属第一医院提供。药物用水浸泡0.5h，先武火再文火煎1h，倒出药汁，共煎3次，将药汁合并，纱布过滤后100℃水浴浓缩至100mL，4℃冰箱保存。西药：舒降支40mg/片，批号：国药准字J20040032，由杭州默沙东制药有限公司提供。阿司匹林100mg/片，批号：BTA6015，由拜尔药业集团有限公司提供。研磨后，双蒸水溶解，4.5mL相当含舒降支1.8mg、阿司匹林4.5mg，4℃冰箱保存。
1.3.3 动物造模 模型组、中药组、西药组高脂饲料喂养4周造成动脉粥样硬化模型，然后行腹主动脉内膜剥脱术造模：25%乌拉坦每100g0.4mL腹腔麻醉家兔，于右侧腹股沟部进行脱毛消毒后利多卡因少量局麻，切皮拨肉分离股动脉，两动脉夹分别夹住股动脉近心远心端暴露2cm左右，剪开动脉周长1/3口，用6F穿刺针刺破动脉壁，经导丝导入直径1.5～2.0mm球囊导管(依血管直径大小而定)，至肾动脉下方，盐水充盈球囊(压力为4～6kPa)，缓慢回拉导管至切口处抽空球囊内液体，使压力降至零，重复上述过程3次，达到剥落腹主动脉内皮的目的。撤出导管，结扎股动脉，缝合皮肤，术后3天连续肌注青霉素每天80万u/只，预防感染。
1.3.4 实验取材 腹主动脉内膜剥脱术后4周处死家兔，切开腹壁暴露腹腔，将肠管翻至一侧，见到腹主动脉与下腔静脉并行于脊柱旁 ......
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