针刺“百会”“太溪”穴对血管性痴呆模型大鼠认知功能的影响
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摘要：目的：观察针刺对血管性痴呆模型大鼠认知功能及脑内胆碱能系统的影响。方法：采用永久性结扎大鼠双侧颈总动脉制作血管性痴呆大鼠模型，应用水迷宫检测大鼠的认知功能，采用比色法测定大鼠脑内胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和乙酰胆碱脂酶(TchE)活性。结果：模型组大鼠的水迷宫潜伏期明显长于治疗组和正常对照组。模型组大鼠海马ChAT活性低于治疗组，且低于正常对照组。模型组大鼠皮层及海马内TchE含量明显高于治疗组和正常对照组，差异皆有统计学意义。结论：针刺可通过对脑内胆碱能系统的调节来明显改善血管性痴呆模型大鼠的认知功能，且对脑内胆碱能系统有明显的调节作用，不仅能够降低TchE活性，而且能够增强ChAT活性，增加脑内Ach的含量，从而达到治疗血管性痴呆的效果。
关键词：针刺；血管性痴呆；胆碱乙酰基转移酶；乙酰胆碱脂酶；认知功能
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2009)05-1037-03
血管性痴呆(VD)是指各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合征，为老年性痴呆常见的类型之一，以认知、记忆、言语、情感、性格等方面的精神减退和消失为主要表现，现普遍认为VD额叶皮层及海马胆碱能神经元的损伤可能是认知功能受损害的形态学基础。有资料统计78%的老年患者患有脑血管疾病，其中80%以上有痴呆，而卒中后存活者中认知损害发生率为26.3%。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
2月龄Wistar雄性大鼠30只，体重(212±15)g，由中国医科大学实验动物中心提供。大鼠被随机分成正常对照组(NC)、血管性痴呆模型组(MM)、血管性痴呆治疗组(MT)(n=10)。
1.2 主要试剂
胆碱乙酰基转移酶(ChAT)检测试剂盒、乙酰胆碱脂酶(TchE)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3 主要仪器
MT-200morris水迷宫跟踪分析系统(S1000)；721型紫外分光光度计；6805-A型电针治疗仪(上海)。
1.4 动物模型的制备
本实验采用永久性结扎双侧颈总动脉(2-VO)法制作血管性痴呆动物模型。大鼠用10%水合氯醛(2mL/500g)腹腔麻醉，仰卧位固定，颈正中剪毛备皮，碘酒消毒，酒精脱碘。行颈正中切口，分离皮肤、肌肉，仔细分离颈总动脉和迷走神经，找出双侧颈总动脉并埋线，手术线结扎双侧颈总动脉，术后对手术局部进行清理，擦净残留淤血，逐层缝合切口，肌肉注射消炎针。治疗组与模型组造模方法相同，同条件饲养，接受不同实验处理。
1.5 针刺方法
针刺治疗组参照按照普通高等教育“十五”国家级规划教材(新世纪全国高等中医院校规划教材)实验针灸学大鼠定位取穴，选取百会、太溪穴，30号0.5寸毫针刺入，接6805-A型电针仪，施以疏密波，频率2Hz，强度以大鼠肢体出现抽动但动物保持安静为度，留针20min，隔日1次，30天为1疗程。模型组给予相同捆绑条件，不予针刺。正常对照组大鼠不予任何处理。
1.6 检测指标及方法
1.6.1 一般情况观察 包括饮食、皮毛、活动等。
1.6.2 行为学检测 通过Morris水迷宫定位航行实验，每次实验大鼠都从同一特定象限特定点放入水池，因其入水后要尽力逃避水患，会在尽短时间内找到平台并栖身于上。记录大鼠在水迷宫中寻找平台的时间及找寻平台游过的轨迹。每次的训练时间设定70s作为逃避到平台上的最大潜伏期。如果大鼠在70s内未找到平台，其潜伏期按70s计算。大鼠在水迷宫中找到平台的时间越短，游过的轨迹距离越短，表明大鼠学习记忆能力越强。以此用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的能力。
1.6.3 检测大鼠脑内ChATTehE活性 各组大鼠饲养30天后断头处死，于冰台上剔除小脑及脑干，快速分离海马及皮层。冰生理盐水冲净表面血迹，滤纸拭干，电子天平称重。加9倍体积的冷生理盐水制成10%的组织液，匀浆器匀浆。4℃，3500r/min离心10min。提取上清液-20℃冻存待测。检测方法为比色法，严格按ChAT、TchE测试试剂盒说明测定ChAT、TchE活性。
1.7 统计分析
实验数据符合正态分布用x±s表示，组间比较采用t检验。采用SPSS10.0统计软件分析处理数据。
2 结果
2.1 一般情况
模型组及治疗组大鼠经结扎双侧颈总动脉后。发现大多数大鼠活动能力低下，自发运动减少，出现眼睑下垂，呼吸抑制，甚至痰鸣音；也有些大鼠术后自发运动增加，出现噪狂症状，如单向转圈，放入饲养箱后则出现绕箱跑跳或蹦出箱外等情况。但术后第2天所有存活大鼠都恢复正常。造模大鼠均出现饮食减少，背毛无光泽，呆卧少动且行动迟缓的表现。经治疗后治疗组大鼠的一般情况好于模型组。
原因分析：根据临床神经受损的观察，术后出现上述情况是因为此类手术易损伤迷走神经和颈交感神经干，迷走神经损伤易出现心率失常和声嘶，若变位损伤，则可出现呛咳，大都可恢复。
2.2 行为学检测
Morris水迷宫记录大鼠的潜伏期，潜伏期越长则空间辨别能力越差。实验结果显示：模型组大鼠的潜伏期明显长于治疗组和正常对照组，二者统计学差异显著(见表1)。
2.3 胆碱能系统检测
乙酰胆碱转移酶(CHAT)检测结果显示：模型组大鼠海马ChAT活性低于治疗组，有统计学意义(P<0.05)，而两组都低于正常对照组，且差异显著(P<0.01)，治疗组与正常对照组皮层ChAT活性比较，无统计学意义(见表2)。
乙酰胆碱酯酶(TchE)测定结果显示：模型组大鼠皮层及海马内TchE含量明显高于治疗组和正常对照组，二者差异显著(P<0.01)，正常对照组与治疗组皮层内TchE含量比较，无统计学意义(见表2)。结果提示：电针可降低模型小鼠海马组织TchE活力，改善学习记忆障碍。
3 讨论
百会属督脉要穴，位居头之巅顶，又与足太阳、手少阳、足少阳和足厥阴等经脉交汇，“脑为元神之府”，故其能调节全身各经脉之经气，使气血上行荣于脑，并同时醒脑升阳、宁心安神，故可增强记忆；太溪穴是肾之精气输注于足跟的腧穴，肾藏精、生髓，为先天之本，且其经脉入络脑，与督脉互通，共主一身阳气。针刺百会、太溪可共奏提神醒脑，益肾生髓，温通经络，扶阳固本之功。
ChAT是胆碱能神经元的特殊标志，也是催化Ach合成的限速酶，常用来研究中枢神经系统胆碱能神经元的含量或用作Aeh含量的间接指标。Ach是由乙酰辅酶A和胆碱在ChAT作用下进行酶促反应合成的，并由TchE所分解变为胆碱和醋酸。有研究表明，Ach是记忆痕迹形成的必要神经递质和长期记忆的生理基础，Ach含量的变化可通过其水解酶TchE的活性反映出来。TchE是胆碱能神经递质乙酰胆碱的水解酶，作为胆碱能系统的关键酶，直接参与植物神经功能调节、大脑思维、记忆等重要功能，其活力直接反映该系统的功能状态。TchE活力有改变时，以上各组织器官功能也会有改变。TchE的量及其活性大小在某种程度上恰好是每次神经冲动刚刚能够应付所释放的TchE的量 ......
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