平糖方促进非酒精性脂肪肝大鼠肝脏PPAR-α和CPT-1mRNA表达(2)
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1.5.5 实时定量PCR 采用Roche lightcycler 480实时定量PCR仪进行实时定量PCR。选择GADPH为内参,GADPH上游引物为5'-TGGTGGACCTCATGGCCTAC-3',下游引物5,-GCAACTGAGGGCCTCTCT-3。PPAR-α上游引物5′CTCGTGCAGGTCATCAAGAA3′,下游引物为5′-CAGCCCTCTTCATCTCCAAG-3′。CPT-1上游引物5′-AGCCATGGAGGTTGTCTACG-3′,下游引物5′-GGCTTGTCTCAAGTGCTTCC-3′实时定量PCR混合物体系总体积为20μL,其中包括SYBR Taq II酶10μL,引物各0.6μL,cDNA2μL,ddH2O6.8μL。实时定量PCR扩增过程:95℃15s预变性,然后95℃5s,60℃15s,72℃20s,45个循环进行扩增,最后95℃5s,65℃1min,1个循环,进行融解曲线分析 ......
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