1.3.2 动物给药处理SPF级封闭状态下正常饲料喂养,2周后分组给药。模型组: 灌胃生理盐水,每日1次,每次0.8mL;中药组: 灌胃中药解毒祛瘀滋阴浓缩液,37.3g/kg体重,约0.8mL,每日1次;西药组: 灌胃强的松混悬液,6mg/kg体重,约0.8mL,每日1次;中西药结合组:中药与西药隔日交替灌胃,用法用量同前。连续饲养用药10周。

    1.3.3 分离小鼠肾脏和脾脏及制备脾细胞悬液 剪开小鼠腹腔,在左右两侧可见红色肾脏,将其取出,放入冻存管,置于-80℃冰箱保存备用。在小鼠右腹侧中部可见红色长条状脾脏,用镊子夹住脾脏,眼科剪剥离下面的结缔组织,将取出的脾脏放置于200目不锈钢网上,用注射器针头轻轻研压,过筛,1500 r/min离心5min,弃上清,300μL PBS液重悬。

    1.3.4 糖皮质激素受体α检测

    (1)Western 印迹杂交 从各组小鼠肾脏标本中提取总蛋白,蛋白上清经SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrohoresis, SDS-PAGE)(5%浓缩胶,8%分离胶)后转移至硝酸纤维素膜,用含1%脱脂奶粉的TBS液封闭1h,加入一抗(鼠抗人GRα单克隆抗体)室温孵育2h,TBST洗涤3次×10min,再加入辣根过氧化物酶标记的二抗于室温孵育2h,TBST洗涤3次×10min,经ECL试剂盒显色,凝胶成像系统扫描处理,显色结果用软件进行灰度分析,并计算蛋白的相对表达水平 ......