蜕皮甾酮对氧化损伤的人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用(3)
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参见附件。
组别Apoptotic rate (%)P
Control0.138±0.125
H2O223.971±1.401# #0.000
E2 (10-8)16.51±1.427**0.000
ECR(10-6)17.34±1.881**0.000
注:Control与H2O2比较,# #P<0.01;E2,ECR与 H2O2比较,**P<0.01。
表2E2和ECR组对H2O2损伤的HLE-B3线粒体跨膜电位(ΔΨM)的影响(n=6,±s)
GroupMIFP
Control273.74±9.117
H2O2166.48±8.402##0.000
E2 (10-8)215.07±8.643**0.000
ECR(10-6) 224.21±10.837**0.000
注:H2O2与Control比较,##P<0.01;E2,ECR与H2O2 比较,**P<0.01。
2.3 各组线粒体膜电位的变化
FCM结果显示:H2O2组的平均荧光强度(MIF)166.48±8.402显著低于空白对照组273.74±9.117,E2和ECR组的平均荧光强度(MIF)分别是215.07±8.643和224.21±10.837,显著高于H2O2组,与H2O2组之间差异具有统计学意义(P<0.01),见表2。
3讨 论
3.1 过氧化氢对实验性鼠晶状体上皮细胞的氧化损伤可诱导晶状体上皮细胞凋亡
自从Kerr等[10]于1972年提出细胞凋亡的概念以来,氧化损伤与细胞凋亡的密切关系受到学术界的关注。Li等[8]用H2O2诱发离体培首次发现晶状体过程中共有的细胞学基础混浊前均有LEC凋亡发生,提出LEC凋亡是所有人和脊椎动物非先天性白内障形成过程中共有的细胞学基础。
本研究用H202孵育人晶状体上皮细胞发生氧化损伤,并观察到HLEC-B3细胞发生凋亡,其凋亡率为(23.971±1.401)%。透射电子显微镜观察凋亡细胞,并呈现出细胞核内异染色质凝集、凋亡到小体形成、凋亡小体脱落等典型的凋亡各阶段变化的全过程。本研究表明H2O2可明显诱导HLEC-B3凋亡。
3.2 电子显微镜观察E2和ECR对HLE-B3凋亡的影响
电子显微镜可直接观察细胞凋亡及凋亡小体形成的形态学变化,排除其他形态学观察中由于标本固定所造成的人为假象,被认为是检测细胞凋亡的金指标[11]。
本研究电镜下观察到:H2O2组HLE-B3绝大多数均处于细胞凋亡的各阶段,可观察到染色质凝集到凋亡小体形成、凋亡小体脱落、凋亡细胞继发性坏死的整个动态过程。与H2O2组比较,E2组胞膜完整,核内异染色质分布均匀,少量聚集在核膜下,未见凋亡继发性坏死;ECR组在电镜下细胞膜完整,只见部分细胞发生凋亡早期或中期改变,核内少量染色质边集,未见凋亡小体形成。
这一结果提示:ECR作用于氧化损伤的HLE-B3,能对其产生保护作用,延缓或减轻了HLE-B3发生凋亡的程度,说明作为中药植物雌激素的ECR有可能起到了类雌激素的作用。
3.3 E2和ECR降低了氧化损伤的HLE-B3的凋亡率 减轻了凋亡程度
通过FCM检测,发现氧化损伤的HLE-B3的凋亡峰明显增高,说明DNA断裂广泛、DNA含量降低明显、凋亡率升高,而E2和ECR的细胞凋亡率与H2O2组相比显著降低(P<0.01),且二者之间无显著性差异(P>0.01)。
这一结果提示:E2和ECR能够减轻H2O2损伤引起的凋亡程度,对H2O2对HLE-B3的损伤有防护作用 ......
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