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穿心莲内酯联合5-FU对人胃癌BGC-823细胞的体内外抑制作用(2)

http://www.100md.com 2010年4月1日杨琼,叶再元,李曙光,马文东

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     1.4 实验方法

    1.4.1 MTT法取指数生长期的 BGC-823细胞,以2.5×105/mL细胞浓度接种于96孔培养板,200μL/孔。待12h细胞贴壁良好后,加入待测药物培养基200μL/孔,穿心莲内酯组终浓度分别为7.5、15、30、60、120μg/mL, 5-Fu组终浓度分别为3.75、7.5、15、30、60μg/mL,穿心莲内酯+5-Fu联合组的终浓度分别为7.5+3.75、15+7.5、30+15、60+30、120+60μg/mL。阴性对照组只加等量的培养液,空白对照无细胞生长,只加试剂。每个剂量设3个平行孔。于24h、48h、72h各取一块96孔培养板,每孔加5mg/mL的MTT 20μL。自动酶标仪于 570nm波长处测各孔吸光度值(OD值)。以上实验重复4次。细胞抑制率(%)=(l-给药孔OD值/对照孔OD值)×100%。回归方程计算中效浓度(IC50):即抑瘤率为50%时的药物浓度。计算合用指数(CI)的,结果判断:CI<1,表示两种药物合用产生协同作用;CI=1,表示两种药物合用产生相加作用;CI>1,表示两种药物合用产生拮抗作用。

    1.4.2 人胃癌皮下裸鼠移植瘤模型的建立取对数生长期的BGC-823细胞,胰酶消化,用PBS洗2次,调整细胞悬液浓度为1×107个/mL。于BALB/C裸鼠右腋下接种移植瘤,每只裸鼠接种1×106个细胞(0.1mL),共接种70只。1周后,肿瘤体积约60~70mm3左右,共52只成瘤。

    1.4.3 体内抗肿瘤药敏实验动物分组及药物干预:选出肿瘤大小相对均匀一致的48只,按瘤体大小先分两层,再随机进行分组,每组8只,共6组。穿心莲内酯研成粉末,溶于生理盐水成悬浊液,配成穿心莲内酯低剂量100mg/(kg•d)(2mg/只)、穿心莲内酯中剂量200mg/(kg•d)(4mg/只)、穿心莲内酯高剂量400mg/(kg•d)(8mg/只)和穿心莲+5FU浓度组[100mg/(kg•d)+ 5mg/(kg•d)]。另设阴性对照组[生理盐水灌胃,0.1mL/(只•d)]和阳性对照组[20mg/(kg•d)(0.4mg/只),隔日给药1次],穿心莲内酯予灌胃,5-FU予腹腔注射,各组均给药14天。

    小鼠生存状态的观察:给药期间每天观察各组裸鼠的精神、饮食、活动、大小便等一般情况,以及死亡情况。用游标卡尺测量瘤体大小,每4天1次。

    用药14天后,电子天平称取瘤重,并按下面公式计算抑瘤率:抑瘤率(%)=(1-实验组平均瘤重/阴性对照组平均瘤重)×100%。

    1.5 统计学处理

    采用SPSS 13.0软件包统计。MTT结果以±s表示,组间比较采用单因素方差分析进行处理。P<0.05认为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 穿心莲内酯与5-Fu联合对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响

    不同浓度的穿心莲内酯、5-FU和联合组作用不同时间后对BGC-823细胞均产生抑制作用,且随药物浓度的增加,作用时间的延长,细胞增殖速度减慢,呈剂量-效应关系和时间-效应关系。相关回归分析可知24,48,72h的半数抑制浓度穿心莲组分别为21.58、 28.42、34.16μg/mL,5-Fu组为56.76、27.50、15.72μg/mL,联合组为17.32(5.77+11.55)、9.54(3.18+6.36)、4.11(1.37+2.74)μg/mL。穿心莲与5-Fu单用时72h的中效浓度分别为两药合用时中效浓度的8.31倍和3.82倍,可以间接地反应出联合用药的优势。

    效应fa为横坐标,CI值为纵坐标作人胃癌BGC-823细胞加药72h的效应-合用指数曲线。结果显示:当效应小于0.97时CI < 1,表示两药合用时产生协同作用;当效应大于0.97时CI<1,表示两药合用时产生拮抗作用。见表1～5、图1～4。

    [BW(D(Y,1,2)MD2]

    [WT5”FZ〗中华中医药学刊

    [BW(S(Z,1,)MD2][WT5”FZ〗中华中医

    药学刊

    表1穿心莲内酯对BGC-823细胞增殖抑制的影响

    ANDRO(μg/mL)24h

    吸光度值A(±s)抑制率IR(%)

    48h

    吸光度值A(±s)抑制率IR(%)

    72h

    吸光度值A(±s)抑制率IR(%)

    00.417±0.0230ab0.558±0.0320b0.659±0.0770b

    7.50.379±0.0339b0.529±0.0305ab0.628±0.0755ab

    150.307±0.04726ab0.396±0.08129b0.456±0.07730ab

    300.222±0.04747ab0.289±0.03548ab0.129±0.08580b

    600.142±0.02766a0.121±0.02878a0.083±0.08987a

    1200.059±0.017860.017±0.084970.018±0.07997

    注:与后面第1组比较,a PP<0 ......

http://www.100md.com/html/paper/1009-5276/2010/04/29-1.htm

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