蝉拟青霉不同纯化组分对体外抗肿瘤作用的基础研究(3)
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参见附件。
3结 果
3.1 MTT法检测DDP ADM 总多糖 总腺苷对PAA-1细胞的生长抑制能力
见表1。
表1DDP ADM 总多糖 总腺苷对PAA-1细胞的生长抑制情况
组别IC50r
DDP9.05μg/mL0
ADM36.21μg/mL20.66
总多糖10.86mg/mL54.52*
总腺苷7.81mg/mL39.51**
3.2 各药联合对细胞生长的影响
3.2.1 多糖和顺铂联合对PAA-1细胞的生长抑制作用 5mg/mL多糖联合16μg/mL,8.0μg/mL,4.0μg/mL顺铂作用时,对PAA-1细胞也有一定的抑制作用,但是与16μg/mL,8.0μg/mL,4.0μg/mL顺铂单独作用的效果分别相比,抑制率均降低,差异有统计学意义(P=0.000188, 639E-06, 0.000526);而5mg/mL多糖联合2μg/mL顺铂与2μg/mL顺铂单独作用相比,两者抑制率无显著差异 (P=0.099>0.05)。总之,5mg/mL多糖和顺铂表现出强烈的拮抗效应,见表2。
表2 顺铂及顺铂联合多糖对PAA-1
细胞生长抑制作用(±s)
组别OD值平均抑制率(%)
阴性对照组0.9745±0.0986 0.00
DDP 16.0μg/mL0.4432±0.052354.52*
DDP 16.0μg/mL +多糖5mg/mL0.6798±0.086430.24*
DDP 8.0μg/mL0.5895±0.058639.51**
DDP 8.0μg/mL +多糖5mg/mL0.8277±0.034615.07**
DDP 4.0μg/mL0.7652±0.0424 21.48***
DDP 4.0μg/mL +多糖5mg/mL0.8802±0.04439.68***
DDP 2.0μg/mL0.8464±0.039613.15
DDP 2.0μg/mL +多糖5mg/mL0.9015±0.0756 7.49
3.2.2 阿霉素联合多糖对PAA-1细胞生长抑制作用 与16μg/mL阿霉素单独作用相比,5mg/mL多糖与阿霉素联合作用时,对细胞的生长抑制率降低,差异有统计学意义(P=0.0308),而与8.0μg/mL、4.0μg/mL、2.0μg/mL阿霉素联合作用时,对应各组的抑制率没有显著性差异(P=0909,0.987,0.891)。总之,5mg/mL多糖与阿霉素表现出拮抗效应,见表3。
3.2.3 顺铂联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用与8.0μg/mL DDP单独作用相比,8mg/mL、0.5mg/mL、025mg/mL浓度腺苷与其联合作用时,对细胞生长抑制作用均无显著差异。因此,腺苷和DDP表现出拮抗效应,见表4。
表3 阿霉素及阿霉素联合多糖
对PAA-1细胞生长的影响(±s)
注:阿霉素16.0μg/mL+多糖5mg/mL与16μg/mL阿霉素单独作用相比,*P=0.0308
表4 顺铂联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用(±s)
组别OD值平均抑制率(%)
3.2.4 阿霉素联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用 8mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL浓度腺苷与4.0μg/mL阿霉素联合作用和4.0μg/mL阿霉素单独作用相比,对细胞生长抑制作用均显著增加,差异具有统计学意义(P=230524E-08, 0000116,9.8488E-05)。数据显示,0.5mg/mL、0.25mg/mL腺苷与4μg/mL阿霉素联合作用时,显示出拮抗效应;而当8mg/mL腺苷与4μg/mL阿霉素联合时,对细胞显示协同效应,见表5。
表5 阿霉素联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用(±s)
组别OD值平均抑制率(%)
注:与4.0μg/mL单药阿霉素作用相比,*P2.30524E-08,**P=0000116,***P=9.8488E-05。
3.3 对体外培养细胞系细胞周期的影响
单DDP组,各浓度腺苷组,DDP和腺苷联合组,多糖组,多糖和DDP,多糖和ADM组中,细胞各周期并未出现明显变化。ADM组,ADM和腺苷联合组的G0/G1期细胞明显减少,特别是单用ADM组,G0/G1细胞特别少,而G2/M期细胞特别增多。ADM和腺苷联合作用,随着腺苷浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐减少,而G2/M期相对增加,见表6。
表6各组处理对体外培养细胞系细胞周期的影响
3.4 对体外培养PAA-1细胞系集落形成率的影响
加化疗药各组,及联合使用各组的集落形成率远低于阴性对照组,而多糖组的形成率和阴性对照组未见明显差异。不同浓度腺苷组的集落形成率略低于阴性对照组,随着腺苷浓度逐渐增加,集落形成率逐渐下降,见表7。
表7 各组处理对体外培养细胞集落形成率的影响(±s)
组别集落数P值
3.5 对体外培养淋巴细胞亚群分化的影响
多糖5.0mg/mL体外处理淋巴细胞24h后,各组加抗体孵育后,流式测分型。经多糖处理和阴性对照组两者之间未看到明显差别,见表8。
表8多糖处理对体外培养淋巴细胞亚群分化的影响
组别阴性对照组(%)多糖5.0μg/mL(%)P值
4讨 论
蝉花是麦角菌科真菌大蝉草(Cordyceps cicadae Shing)寄生于蝉科昆虫山蝉(Cicada flammata Dist)若虫上的子座及若虫尸体的干燥复合体。蝉花药用已经有1000多年时间,含有多种必须氨基酸、真菌多糖、腺苷、生物碱、麦角甾醇、虫草素酸等成分,具有滋补强壮,抗疲劳抗应激以及免疫调节作用,所含的虫草多糖具有抗肿瘤作用[1]。与冬虫夏草相比,两者的菌株均为蝉拟青霉[Paccilomyccs cicadac (Miqucl.)Samson],含有相近的成分,因此蝉花常被用作冬虫夏草的代用品[2]。目前在市场上流通的蝉花药材基本上为无性型的蝉拟青霉药材。
化疗是治疗肺癌的主要手段之一。但是化疗药物都有较强的毒副作用,并且治疗中癌细胞容易产生耐药性。为了增加肿瘤细胞对化疗的敏感性,降低药物的毒副作用,许多医生在应用化疗药物的同时给病人进行中医中药扶正治疗。多年的研究观察表明, 化疗同时配合中医中药辨证治疗, 能减轻化疗的毒副反应, 增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性, 提高机体对化疗的耐受性, 尤其在延长中位生存期和生存率方面有良好的疗效。
蝉花作为一味名贵中药,在临床上多用于镇痛,镇静,提高机体的免疫能力,改善病人的营养状况,实践中也有将蝉花应用于中药抗肿瘤[2],但是蝉花的直接杀伤肿瘤作用有待开发。
蝉拟青霉中主要的活性成分包括虫草多糖、腺苷以及虫草素 ......
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