复方茯苓甘草汤防治慢性常压低氧性肺动脉高压的有效成分筛选实验研究(2)
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参见附件。
2.5 右室肥厚指数测定 分别称量右心室自由壁重量(RV)、左心室加室间隔重量(LV+S),计算右室肥厚指数[RV/(LV+S)]。
2.6 肺血管病理学观察及形态学测量 利用显微镜和Nikon ACT-2U图像采集分析系统观察分析指标[6]:①肺血管病理学观察:分别观察HE、Weigert氏弹力纤维染色切片,观察各组肺小血管壁结构的变化。②三型肺血管百分比测定:镜下观察并计数每张切片中直径(50～200)μm肺
表3药液组分筛选阶段的大鼠分组表
组别灌胃的药液成分大鼠数量(只)剂量(g生药•kg-1•d-1)造模方法
1蒸洗液+30%液+60%液+95%液4 各40低氧
2蒸洗液+30%液+60%液4各40 低氧
3蒸洗液+30%液+95%液4各40低氧
4蒸洗液+30%液4各40低氧
5蒸洗液+60%液+95%液 4各40低氧
6蒸洗液+60%液 4各40低氧
7蒸洗液+95%液 4各40低氧
8蒸洗液 440低氧
930%液+60%液+95%液4各40低氧
1030%液+60%液4各40低氧
11 30%液+95%液4各40低氧
1230%液440低氧
1360%液+95%液4各40低氧
1460%液440低氧
1595%液440低氧
16 (空白)(即生理盐水)4-低氧
血管肌型动脉(MA)、部分肌型动脉(PMA)、无肌型动脉(NMA)数目,分别计算占肺血管总数的百分比。③肌型动脉中膜面积与管腔面积比值测定:每只大鼠选一相同肺组织横向切片,对每张切片肺腺泡内肌型动脉[直径(50～200)μm]各6支作图像分析,测定中膜面积(MA)、管腔面积(LA);计算比值(MA/ LA)。
2.7 免疫组化检测 制备肺组织标本,据试剂盒说明与操作步骤完成,镜检观察。
2.8 统计分析 SPSS 13.0统计软件进行分析,计量资料用均数()表示,多样本均数比较采用正交设计方法[2,7]进行分析,用S-N-K法,P<0.05时差异有统计学意义。
3结 果
3.1各组一般状况观察
实验前各组大鼠的体重、一般状况均无差别。实验的第22天,第1、3、5、7、9、11、13、15组体重增加,一般状况良好,毛发柔顺,无气喘。第2、6、10、14组体重增加,一般状况改善,毛发较柔顺,无气喘。第4、8、12组体重无明显变化,活动减少,毛发较干枯,有气喘,鼻及唇周未见发绀。第16组体重明显减轻,活动减少,食量下降,毛发干枯无光泽,气喘明显,鼻及唇周发绀。
处死大鼠开胸后,见第1、3、5、7、9、11、13、15组两肺表面光滑,粉红色,柔软有弹性,右心室肥厚减轻。第2、6、10、14组肺脏大体观察均有改善,右心室肥厚减轻。第4、8、12组肺脏大体观察均有改善,右心室肥厚有所减轻。第16组两肺表面凹凸不平,呈灰白色,弹性差,多处局灶性瘀血,右心室明显增厚。
3.2各组肺小动脉病理形态学的变化
第1、3、5、7、9、11、13、15组肺小动脉内皮细胞连续性破坏程度较第16组轻,中膜平滑肌细胞增生、内外弹力层距离、管壁ECM沉积及外膜炎性细胞浸润均较第16组减轻,肺泡间无肌型动脉肌化现象减少,见图1。第2、6、10、14组大鼠模型的肺小动脉病理形态学总体上也有改善,但比不上上述各组。第4、8、12组大鼠模型肺小动脉内皮细胞细胞连续性受破坏,变性肿胀突向管腔,内外弹力层有断裂或不规则皱褶样变化现象,中膜平滑肌细胞出现增生肥大,内外弹力层距离增宽,管壁弹性蛋白和胶原蛋白沉积增多,外膜炎性细胞浸润,管壁增厚,管腔狭窄或呈不规则样。肺泡间无肌型动脉内膜轻度增生肥厚,弹力纤维有增生,并出现平滑肌,见图2。第16组大鼠模型肺小动脉内皮细胞细胞连续性受破坏,变性肿胀突向管腔,甚至坏死脱落,内外弹力层断裂或不规则皱褶样变化,中膜平滑肌细胞明显增生肥大,内外弹力层距离增宽,管壁弹性蛋白和胶原蛋白沉积增多,外膜炎性细胞浸润,管壁增厚,管腔狭窄或呈不规则样。肺泡间无肌型动脉内膜增生肥厚,弹力纤维增生,并出现平滑肌,见图3。
图1 (HE×400)第1组肺组织
图2 (HE×400)第4组肺组织
图3 (HE×400)第16组肺组织
3.3 各组平均肺动脉压 右室肥厚指数 肺血管病理学指标的变化 见表4。
表4各组大鼠模型mPAP RV/(LV+S)和肺血管病理学指标()
试验号(组别)mPAP均数(mmHg)RV/(LV+S)均数MA均数(%)PMA均数(%)NMA均数(%)MA/ LA均数(%)
118.600.262014.5013.5072.0024.72
221.100.284517.4814.7467.7830.15
321.020.284317.6514.8567.5030.26
428.120.365223.3015.6561.0531.73
520.580.277517.1514.8568.0030.05
621.250.283317.7215.2067.0830.43
720.600.278417.1814.5268.3029.84
827.570.367624.9416.0059.0630.76
920.350.273516.9514.6868.3728.28
1020.500.274017.0814.5768.3528.46
1120.530.275217.1014.6268.2828.84
1227.600.369525.0215.9059.0831.35
1320.210.271016.8514.8068.3528.15
1419.080.276616.9414.8868.1826.14
1518.460.270215.6514.3769.9825.76
1628.240.367125.7617.0057.2431.65
尚不能认为蒸洗液与30%液不能降低大鼠模型mPAP、RV/(LV+S)、MA(%)、PMA(%)和MA/ LA,升高NMA(%)。
可认为60%液与95%液能使大鼠模型mPAP、RV/(LV+S)、MA(%)、PMA(%)和MA/ LA降低,NMA(%)则升高。
尚不能认为第4组、第6组、第7组、第10组、第11组、第13组这6个组所产生的交互作用,对大鼠模型mPAP、RV/(LV+S)、三型肺小动脉所占的比例以及MA/LA有影响(它们的P>0.05)。也即尚不能认为蒸洗液、30%液、60%液、95%液这4种提取液之间的一级交互作用对大鼠模型上述指标有影响。
尚不能认为第2组、第3组、第5组、第9组这4个组所产生的交互作用,对大鼠模型mPAP、RV/(LV+S)、三型肺小动脉所占的比例以及MA/LA有影响(它们的P>005) ......
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