ICAM-1在乳腺浸润性导管癌中表达情况的初步研究(2)
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参见附件。
1.2免疫组织化学检查及结果判断标准 采用 EnVision二步法。石蜡切片脱蜡水化后,采用0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.0),压力锅抗原修复,H2O2阻断内源性过氧化物酶。加入一抗鼠抗人ICAM-1单克隆抗体(购自北京中杉金桥生物技术有限公司),4℃孵育过夜。采用二抗(DAKO公司,EnVision检测系统)试剂盒,DAB显色,苏木素复染。PBS 代替一抗作阴性对照,用已知阳性标本作为阳性对照。
结果观察和判断标准:以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。参照Shimizu等评分标准[2],按细胞着色有无及深浅评分:0 分:细胞无着色;1 分: 显色为淡棕黄色; 2分:显色为棕黄色;3分:显色为棕褐色。按切片中被观察组织显色细胞比例评分,1 分:显色细胞占切片中同类细胞总数1/3 以下;2 分:1/3～2/3 细胞显色;3 分:2/3 以上细胞显色。每例肿瘤积分= A+B,按积分高低分为阴性(-) 0 分,弱阳性(+) :1～3分;阳性(++):4～6分;强阳性(+++):7～9分。同时观察癌巢、癌间质及周围正常乳腺导管上皮的阳性情况。由两名富有经验的病理医师独立对染色结果分别进行评分,对同一病例的评分结果取平均值作为该病例的最终评分。
1.3统计学分析 所有数据采用SPSS 12.0统计软件包处理,等级频数资料采用成组设计多个样本比较的秩和检验,各组资料的比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman秩相关分析,P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1ICAM-1在乳腺癌切片中不同组织成分“癌巢”“癌间质”及“正常乳腺导管上皮”的表达程度
ICAM-1在乳腺IDC癌巢中的表达主要为阴性或弱阳性,阳性病例表现为癌细胞胞浆中淡棕黄色染色,部分病例发现肿瘤浸润前沿无ICAM-1的表达,而靠近主体表达相对较强,见表1,图1;在癌间质中均呈中等或强阳性表达,主要表现为癌间质中淋巴细胞、血管内皮细胞、组织细胞、成纤维细胞及肌纤维母细胞的胞浆中强染色,呈均匀一致弥漫性棕褐色染色,胶原纤维无染色,见图1;癌旁正常乳腺导管上皮中,ICAM-1均有不同程度的表达,肌上皮及腺上皮细胞均呈不同程度的胞浆棕黄色或棕褐色染色,部分导管上皮的腔缘呈强染色,较胞浆明显,见图2。
图1 癌间质强阳性,癌细胞阴性(×200)
图2 正常乳腺导管上皮强阳性(×200)
ICAM-1表达程度上的比较,由于是等级频数资料,故采用成组设计多个样本比较的秩和检验,计算检验统计量Hc=98.98。查χ2界值表x20.05,3-1 =10.60,P<0.05,有显著统计学意义。说明癌间质、正常乳腺导管上皮及癌巢的ICAM-1的表达在程度上存在有有差异的见表2。再通过3个样本间两两比较的秩和检验(Nemenyi法),发现在ICAM-1的表达上癌间质、正常乳腺导管上皮均与癌巢有程度上的差别,P<0.05,其差异有统计学意义。而癌间质与正常乳腺导管上皮的ICAM-1表达无差别,P>005。
表1 乳腺标本不同组织成分的ICAM-1的表达情况比较
不同组织成分ICAM-1的表达情况
-++++++
合计
癌巢13286249
正常乳腺上皮00192948
癌间质0064349
表2 3个样本间两两比较的秩和检验
对比组A与B样本含量nAnB两组平均秩和之差的绝对值0.05界值P
一与二494814.3519.48>0.05
一与三494974.0519.38<0.05
二与三484959.7019.48<0.05
注:一:代表癌间质,二:代表正常乳腺,三:代表癌巢。
2.2 ICAM-1在乳腺IDC癌巢中表达阳性率与淋巴结转移 组织学分级及TNM分期之间的关系
ICAM-1在乳腺IDC癌巢中的表达阳性率(73.47%)明显低于癌旁正常乳腺导管上皮(100%)(P<0.05);ICAM-1在乳腺IDC癌巢中的表达阳性率与淋巴结转移呈负相关(rs=-0.312, P<0.05),而与TNM分期及组织学分级无关。(P<0.05);在乳腺浸润性导管癌组织中ICAM-1的表达与临床分期无关(第6版AJCC乳腺癌TNM临床分期)(P>0.05)及组织学分级无关(按照SBR组织学分级)(P>0.05)见表3。
3 讨 论
恶性肿瘤一个重要生物学特征是其对临近正常组织的浸润及远处转移。目前已知肿瘤的浸润与转移与其黏附分子表达改变有关。黏附分子是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间黏附作用的膜表面糖蛋白,它们在正常组织结构的维持、炎症与免疫应答、伤口修复、凝血与血栓形成以及肿瘤浸润和转移等多种生理病理过程中均具有重要作用。ICAM-1属于免疫球蛋白超家族成员,是淋巴细胞相关抗原-1的主要配体,是一类可促进细胞黏附的大分
表3 乳腺癌患者临床病理特征与ICAM-1表达的关系
临床病理特征nICAM-1阳性例数(%)χ2值P
组织类型14.71<0.05
乳腺癌组织4936(73.47)
正常乳腺上皮4848(100)
腋淋巴结转移4.23<0.05
有2213(59.09)
无2723(85.19)
组织学分级2.10>0.05
Ⅰ54(80.0)
Ⅱ3423(67.65)
Ⅲ109(90.0)
TNM分期3.68>0.05
Ⅰ1714(82.35)
Ⅱ2216(72.73)
Ⅲ96(66.67)
Ⅳ10(0)
子,在肿瘤细胞的转移过程中发挥了重要的作用。同时ICAM-1主要起异嗜黏附作用,其表达异常对肿瘤细胞转移行为可产生重要影响。ICAM-1作为免疫球蛋白超家族黏附分子的一种,在机体免疫过程和炎性反应中起重要作用,尤其是其在恶性肿瘤中的表达与肿瘤诊断、浸润转移、机体免疫功能调节之间的关系已成为研究的热点 ......
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