健足颗粒对糖尿病皮肤溃疡大鼠血清NOET-1水平的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.2药物
健足颗粒(炙黄芪15g,苍术10g,当归10g,汉防己10g,忍冬藤15g,玄参10g,鬼箭羽10g,威灵仙10g),由浙江省中药研究所制剂室提供。盐酸二甲双胍片:正安医药(天津)有限公司,批号:060509。糖脉康颗粒:成都中汇制药有限公司,批号:060914。消旋山莨菪碱片:杭州民生药业集团有限公司,批号:107D285。
1.3糖尿病皮肤溃疡大鼠模型的建立
给大鼠喂饲高脂饲料(50%基础饲料、10%熟猪油、25%蔗糖、15%蛋黄粉)1周,在大鼠尾静脉注射四氧嘧啶40mg/kg,5天后测血糖,筛选血糖值在20～33mmol/L之间为符合标准的糖尿病大鼠,建立糖尿病大鼠模型。然后用戊巴比妥钠麻醉大鼠后,用刀片在大鼠小腿划一个约1cm长的切口,深达皮下,并注入1mL金黄色葡萄球菌悬液(由浙江中医药大学生命科学学院提供),以引起皮肤溃疡、甚至坏死,制作成大鼠皮肤溃疡模型。
1.4 实验动物分组
选用清洁级SD雄性大鼠90只,体重(200±20)g,习惯性饲养1周后,随机选取6只为正常对照组(正常组),其余84只均以尾静脉注射四氧嘧啶40mg/kg,除8只不符合糖尿病诊断标准的大鼠予以剔除外,76只用于建立糖尿病皮肤溃疡模型造模,随机分成6组,模型对照组16只、健足颗粒干预的高剂量组(健足颗粒高剂量)12只、中剂量组(健足颗粒中剂量)12只、低剂量组(健足颗粒低剂量)12只、中药糖脉康对照组(中药对照组)12只、化学药物二甲双胍加654-2阳性对照组(西药对照组)12只。
1.5给药剂量与方法
健足颗粒(加减防己黄芪汤)根据临床用药剂量,折算成大鼠使用剂量,高、中、低剂量分别是:12、6、3g/kg(分别为成人临床日用药量的20、10、5倍,成人体重按60kg计);糖脉康颗粒剂量10g/kg(成人日用药量的10倍,体重按60kg计);盐酸二甲双胍片125mg/kg,消旋山莨菪碱片5mg/kg(成人日用药量的10倍,体重按60kg计)。各组药物在灌胃时根据大鼠体重,稀释成相同的用量。正常对照组给予基础饲料,同时用与各药物治疗组相同用量的生理盐水灌胃,每日1次。其余6组除给予高脂高糖饲料外,模型组还用与各药物治疗组相同用量的生理盐水灌胃,每日1次;健足颗粒高、中、低剂量组分别用12、6、3g/kg的健足颗粒灌胃,每日1次;中药对照组用10g/kg的糖脉康溶解液灌胃,每日1次;西药对照组用125mg/kg的二甲双胍片灌胃,8周后开始联合消旋山莨菪碱片5mg/kg溶解液灌胃,每日1次。各组均自由饮水,干预治疗10周。
1.6 NO和ET-1水平的检测
血清一氧化氮(NO)浓度采用化学法测定,其应用原理是NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐,后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物,通过比色可间接测知NO浓度。NO测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。血浆ET-1水平采用放射免疫法(RIA)测定,试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。所有样本均由专人严格按产品说明书操作。
1.7 统计学方法
采用SPSS 11.5统计软件。计量资料数据以均数±标准差(±s)表示,采用方差分析对各组均数进行显著性检验,P<0.05时有统计学意义。
2结 果
2.1血清一氧化氮(NO)的变化
研究结果显示,与正常组比较,模型组大鼠血清的一氧化氮NO含量明显偏低。与模型组比较,各治疗组大鼠血清一氧化氮NO含量均有不同程度升高,其中健足颗粒高剂量组最明显(P<0.001),中剂量明显(P<0.01),低剂量、中药对照组次之(P<0.05),西药对照组也有轻度升高,但无显著统计学意义(P>0.05)。健足颗粒各剂量组的调节作用与剂量呈现相关性。见表1。
表1 各组大鼠血清NO水平的变化
组别血清NO(μmol/L)
正常组38.90±9.87
模型组10.32±3.13▲▲▲
健足颗粒高剂量24.65±4.95***
健足颗粒中剂量19.74±7.04**
健足颗粒低剂量15.10±5.22*
中药对照组17.10±7.26*
西药对照组13.16±4.38
注:与正常组比,▲▲▲P<0.001;与模型组比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
2.2血浆ET-1水平的变化
结果显示,与正常组比较,模型组大鼠的血浆内皮素-1(ET-1)含量明显偏高。与模型组比较,各治疗组糖尿病皮肤溃疡大鼠的血浆ET-1含量却有不同程度的降低,其中健足颗粒高剂量组降低最明显(P<0.001),中剂量明显(P<0.01),低剂量、中药对照组次之(P<0.05),西药对照组也略微降低,但无统计学意义(P>0.05)。见表2,图1。
表2 各组大鼠血浆ET-1水平的变化
组别血浆ET-1(pg/mL)
正常组59.28±3.41
模型组90.15±8.31▲▲▲
健足颗粒高剂量73.34±7.33***
健足颗粒中剂量80.66±5.73***
健足颗粒低剂量83.22±6.01*
中药对照组86.88±4.71
西药对照组88.48±7.02
注:与正常组比,▲▲▲P<0.001;与模型组比,*P<0.05;**P<0.01,***P<0.001。
图1 NO和ET-1水平
3讨 论
糖尿病皮肤溃疡属中医“消渴”、“阴疽”、“溃疡”等范畴。中医学认为,糖尿病及其并发症多以阴虚为本,燥热为标,兼杂湿浊,日久内阻气机,而致脏腑功能失调,气血不生;外蕴肌肤,壅滞脉道,瘀阻经络,导致气血不通,肢体失养。如阙华发等[4]指出“虚”、“瘀”是糖尿病溃疡创面难以愈合的关键。笔者研究认为脾虚失运乃糖尿病皮肤溃疡的发病基础,运脾通络是治疗糖尿病及其并发症的重要环节。如《素问•太阴阳明论》云:“脾病而四支不用何也?岐伯云:四支皆禀气于胃,而不得至经,必因于脾,乃得禀也。今脾病不能为胃行其津液,四支不得禀水谷气,气日以衰,脉道不利,筋骨肌肉皆无气以生,故不用焉。”
研究表明,糖尿病皮肤溃疡的发病原因主要是血管病变、神经病变、并发感染等3个方面。而血管病变导致血液循环障碍,局部组织呈慢性缺血、缺氧状态,直接影响溃疡愈合的程度及其预后,并且由于局部组织的缺血、缺氧,易于并发感染,导致溃疡发生且难以愈合[5-6]。故认为血管病变是糖尿病皮肤溃疡发病的重要病机之一。血管内皮功能的改变是糖尿病血管并发症的始发因素。而ET是由血管内皮细胞合成和释放的具有强烈缩血管和促进细胞生长增殖的活性多肽[7];NO 是由内皮细胞合成释放的一种具有很强舒血管作用的血管活性物质,被称作内皮源性舒张因子;在保持血管稳定上起关键作用,NO还可抑制血小板的凝集,血管平滑肌的增殖以及抑制白细胞黏附于血管壁。范冠杰[8]认为NO和ET是最强的内源性血管舒张和收缩因子 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1934kb)。