红花黄色素对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响(2)
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参见附件。
1.4.3免疫组化法检测Col I和FN的表达 按S-P法试剂盒说明进行操作,测定Col I和FN的表达水平。采用Image Pro Plus多媒体彩色病理图像分析软件进行分析。
1.5统计学方法
数据由第一作者采用SPSS 11.0(SPSS,Chicago)统计包进行统计学分析,计量资料采用±s表示,多组均数间比较采用One-Way ANOVA分析,以P<0.05为差异有显著性。
[BW(D(Y,1,2)MD2]
[WT5”FZ〗中华中医药学刊
2结 果
2.1肾功能检测
表1各组大鼠的肾功能情况
组别nBUNScr
假手术组107.15±0.5747.25±3.41
UUO组1012.04±0.71*57.02±2.19*
厄贝沙坦组1011.79±0.96*△55.46±2.77*△
红花黄色素组1010.57±1.14*△55.29±2.53*△注:与假手术组相比,*P<0.05;红花黄色素组与厄贝沙坦组相比,△P>0.05。
造模成功后UUO组大鼠血尿素氮和肌酐水平均显著升高,与假手术组相比,差异有显著性(P<0.05);红花黄色素组与厄贝沙坦组相比,上述指标差异无显著性,无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.2肾组织病理改变
假手术组HE染色无明显变化;UUO组与术后第7天开始出现明显的肾小管细胞肿胀,肾小管局灶性萎缩,肾小管间质变宽,其中可见纤维细胞增生和少量淋巴单核细胞浸润;第14天时则表现为肾小管的严重破坏,肾小管和集合管扩张,管腔塌陷,小管间质显著增宽,间质内大量弥漫分布的单核巨噬细胞,较多的成纤维细胞分布。IRB组和SY组病理改变与UUO组相类似,但程度明显减轻。Masson染色提示假手术组的肾脏胶原主要位于肾小球基底膜、系膜区和小管周围毛细血管;UUO组可见肾组织间质胶原沉积显著增加,在14天时病变更为显著。IRB组和SY组与同期的UUO组相比,间质增宽程度和胶原沉积程度降低,有显著的统计学差异(P<0.05),但仍比假手术组显著增多(P<0.05),IRB组和SY组之间同期比较无统计学差异(P>0.05)。各组大鼠肾脏间质纤维化相对面积见表2。
表2各组大鼠的肾脏间质纤维化相对面积(%)
组别n第7天第14天
假手术组102.13±0.362.17±0.41
UUO组1018.03±3.91*27.13±2.97*
厄贝沙坦组1013.38±1.59*△17.31±1.72*△
红花黄色素组1012.48±1.36*△15.45±1.51*△
注:与假手术组相比,*P<0.05;与UUO组相比,△P<0.05。
2.3免疫组化
Col I在假手术组中仅有少量表达,肾小球和肾小管中无阳性表达,而在UUO组中则大量表达于肾脏间质;FN在假手术组中仅在肾小球和肾小管基底膜少量表达,而在UUO组中,在萎缩的肾小管周围及肾小球、肾小管基底膜等处均可见强烈的表达。上述指标在IRB组和SY组中,虽表达部位与UUO组相同,但表达程度显著减轻(P<0.05),IRB组和SY组之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。
表3各组大鼠的肾组织免疫组化结果
组别n型胶原(Col I)第7天第14天
纤维连接蛋白(FN)
第7天第14天
假手术组107.15±1.897.21±1.233.99±0.754.21±1.13
UUO组1092.15±8.32*159.37±29.5*83.06±12.55*155.46±11.48*
厄贝沙坦组1057.83±11.25*△78.29±15.32*△43.67±5.41*△75.26±7.15*△
红花黄色素组1063.19±15.76*△94.37±14.33*△41.57±5.72*△73.92±7.22*△ 注:与假手术组相比,*P<0.05;与UUO组相比,△P<0.05。
3讨 论
肾脏间质纤维化是由各种原因的肾脏疾病引起的肾脏功能进行性恶化的过程,最终导致肾功能衰竭,其主要的病理基础是细胞外基质堆积和在间质的积聚。目前认为其发生发展的机理在于:各种炎症因子的释放和炎细胞的浸润,激活成纤维细胞和各种纤维化相关的生长因子如TGF、PDGF等的活化,促进肾小管上皮细胞发生转分化,向着成纤维细胞的方向发展;另外,调控细胞外基质合成/降解的一系列酶系统在多种细胞因子/生长因子的作用下发生功能紊乱,是的基质合成增多,降解减少,从而促进肾脏纤维化的进程。临床上常用的血管紧张素II受体拮抗剂如厄贝沙坦等可以减轻上述过程的进展,在一定程度上延缓肾纤维化的进程。寻找更多的抗纤维化药物是目前肾脏病学的主要任务之一[1-2]。
红花黄色素是从红花中提取的有效成分,属于水溶性黄酮中的查尔酮类分子,研究发现其具有扩血管、抗血栓形成、抗动脉粥样硬化、保护中枢神经系统等多重药理学效应,在心血管疾病中已开始系列临床观察[3-4]。
单侧输尿管结扎(UUO)是研究肾小管间质纤维化的成熟的动物模型。在本实验中,观察到大鼠肾脏体积增大、皮质变薄,肾间质炎症细胞浸润、肾小管扩张、坏死,肾间质面积增宽,胶原堆积,间质纤维化等系列病理改变,符合慢性进展性肾纤维化的特点,提示该模型的建立是成功的。
本研究采用经典的UUO模型,予以红花黄色素进行干预治疗,并采用血管紧张素II受体拮抗剂厄贝沙坦作为对照,进一步观察红花黄色素对大鼠肾纤维化的治疗作用。UUO组肾脏病理见肾小管破坏明显,间质单核巨噬细胞浸润、成纤维细胞增生,Masson染色见间质胶原堆积增多,间质纤维化成灶性分布;厄贝沙坦组和红花黄色素组的病理改变虽然与UUO组类似,但程度明显减轻。
如前所述,细胞外基质的堆积与纤维连接蛋白(FN)密切相关,FN是一种细胞外基质糖蛋白,可与多种基质成分结合,促进细胞外胶原I(Col I)-IV和蛋白多糖成分的沉积,FN在肾脏纤维化病变中表达较早,同时FN还是成纤维细胞的趋化剂[5]。因此,降低FN合成和表达对于防治肾小管间质纤维化是至关重要的。多项研究显示,在外源性转化生长因子的刺激下,肾脏近曲小管可产生FN和Col I等基质成分[6]。本研究显示,UUO组大鼠在第7天、第14天肾组织中FN和Col I表达均较假手术组显著增强,而予以厄贝沙坦、红花黄色素治疗的,上述指标有不同程度的下降,以上说明,红花黄色素可改善大鼠肾组织病变,减少肾脏间质纤维化发生的面积。
综上,红花黄色素可明显减轻大鼠UUO术后的肾脏病变,降低肾组织FN和Col I的表达,抑制细胞外基质在肾间质的堆积,延缓肾小管损伤及肾纤维化的进展 ......
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