冠心合剂对家兔颈动脉球囊损伤后血管形态学的影响(2)
参见附件(12kb)。
2.1 动脉组织HE染色
分别于术后第2、4、6周处死各组动物，取手术侧病变总动脉剥离干净，生理盐水冲洗，置于10%中性甲醛固定液中固定过夜，于标本增厚最明显处横向切开，石蜡包埋，切片，切片厚3～5μm。步骤： ①常规脱蜡至水化；②苏木素液浸染5min；③自来水冲洗；④加入0.5%盐酸酒精，边镜检边分色；⑤自来水冲洗使背景返蓝；⑥加入伊红染液3分钟；⑦自来水冲洗；⑧梯度酒精下行脱水、透明、中性树胶封片。
2.2 测定内膜厚度/中膜厚度比(I/M)、内膜/中膜面积比(SI/SM)
在光镜下观察其病理学改变并照相，采用Image-ProPlus图像分析系统(美国Media Cybernetics公司)，操作过程中光强度与放大倍数不变，每个目标血管各取2张切片，每张切片随机选取5个血管环测定各层面积，最后计算10个血管环所得的数据均值作为该标本的最终数据。依次计算各组各时间点内膜增生指标：内膜厚度/中膜厚度比(I/M)、内膜/中膜面积比(SI/SM)。
3 统计学分析
正态性分布资料用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 16.0软件包, 方差齐性指标进行单因素方差分析及两两比较q检验，方差不齐的指标进行独立样本秩和检验及两两比较。P<0.05表示有统计学意义。
4 结 果
4.1 取材时观察
假手术组颈动脉呈乳白色，与周围组织无明显粘连；模型组颈动脉明显增粗，呈黄白色，横切面上血管腔变小甚至接近闭塞，同对侧相应血管形成鲜明对比，与周围组织粘连明显；各治疗组动脉均有不同程度的狭窄。
4.2 颈动脉病理光镜下观察
模型组颈动脉壁内膜、中膜和外膜，三者分界清楚，动脉内膜呈均一或不均一增厚，管腔呈向心性或偏心性狭窄，管壁凹凸不平，内膜平滑肌细胞增生明显，内弹力板有不同程度破坏、断裂，中膜可见损伤，外膜增厚，腔内无血栓，管腔明显缩小；假手术组管腔面的单层血管内皮细胞连续排列，内弹力板完整，内弹力板内有极少量结缔组织，无平滑肌存在，内膜面积为零；冠心合剂各剂量组内膜均有不同程度增生，管腔狭窄，见图1～3。
4.3 I/M值测定
假手术组各时间点I/M值为0，与其他各组同时间点比较明显降低(P<0.01)；模型组各时间点I/M较其他各组同时间点明显升高(P<0.01)；冠心合剂中剂量组6周I/M值与冠心合剂大剂量组2周、4周比较，差异无统计学意义(P>0.05)；冠心合剂大剂量组2周I/M值与4周相比，差异无统计学意义(P>0.05)；其他各组各时间点两两比较I/M值差异有统计学意义(P<0.05)。冠心合剂大剂量组6周降低I/M值效果最好。
4.4 SI/SM值测定
假手术组各时间点SI/SM值为0，与其他各组同时间点比较明显降低(P<0.01)；模型组各时间点SI/SM较其他各组同时间点明显升高(P<0.01)；冠心合剂大剂量组2周SI/SM值与4周比较，差异无统计学意义(P>0.05)；其他各组各时间点间两两比较SI/SM值差异有统计学意义(P<0.05)。冠心合剂对降低SI/SM值的疗效呈剂量和时间依赖性，其中冠心合剂大剂量组6周降低SI/SM值的效果最好。
表1 冠心合剂对I/M SI/SM比值的影响(%)
注：与同处理时间的E组比较，▲P<0.05；与同处理时间的D组比较，●P<0.05；各组其他处理时间与本组2周的比较，■P<0.05。
5 讨 论
PTCA术后再狭窄(restenosis,RS)的发生影响并限制了它的疗效和应用，目前RS的发生机制及防治成为研究热点之一。Gibbons等[2]提出了血管重塑的概念，指血管直径的变化或血管壁结构的改变，分为扩张型重塑(适应性重塑、正重塑)和收缩型重塑(非适应性重塑、负重塑)，前者可以减轻或没有再狭窄，后者使狭窄加重。血管重塑贯穿于血管成形术后的全过程，是细胞增殖、死亡、迁移以及细胞外基质合成和降解所致的血管壁结构动态变化的过程，而该过程与生长因子、血管活性物质和血流动力学刺激等因素有关。
目前研究认为血管重塑的可能机制：(1)内皮功能不全：内皮细胞通过释放血管活性物质或生长因子可使其具有活性，影响细胞的增殖、凋亡、细胞外基质的沉积，直接参与血管的重塑。内皮功能不全可能是收缩性重塑一个启动因素。球囊扩张后损伤血管内皮细胞，使其舒张血管作用减弱、消失，而血小板释放的缩血管物质增加，内皮素和凝血酶受体表达增多，促使血管收缩。有研究表明，内皮功能改变越大，血管成形术后再狭窄越严重。氧化作用通过增加NO的分解而可能引起内皮功能不全，影响血管的收缩性重塑。阻止氧化作用可阻止再狭窄，抗氧化剂通过增强血管成形术后的扩张性重塑而发挥其抗再狭窄作用。(2)平滑肌细胞的增殖与凋亡：血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移最终使新生内膜形成，使血管壁结构发生了变化。VSMC凋亡与细胞增殖一样是普遍存在的生理现象，有助于维持细胞数目的恒定 ......
2.1 动脉组织HE染色
分别于术后第2、4、6周处死各组动物，取手术侧病变总动脉剥离干净，生理盐水冲洗，置于10%中性甲醛固定液中固定过夜，于标本增厚最明显处横向切开，石蜡包埋，切片，切片厚3～5μm。步骤： ①常规脱蜡至水化；②苏木素液浸染5min；③自来水冲洗；④加入0.5%盐酸酒精，边镜检边分色；⑤自来水冲洗使背景返蓝；⑥加入伊红染液3分钟；⑦自来水冲洗；⑧梯度酒精下行脱水、透明、中性树胶封片。
2.2 测定内膜厚度/中膜厚度比(I/M)、内膜/中膜面积比(SI/SM)
在光镜下观察其病理学改变并照相，采用Image-ProPlus图像分析系统(美国Media Cybernetics公司)，操作过程中光强度与放大倍数不变，每个目标血管各取2张切片，每张切片随机选取5个血管环测定各层面积，最后计算10个血管环所得的数据均值作为该标本的最终数据。依次计算各组各时间点内膜增生指标：内膜厚度/中膜厚度比(I/M)、内膜/中膜面积比(SI/SM)。
3 统计学分析
正态性分布资料用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 16.0软件包, 方差齐性指标进行单因素方差分析及两两比较q检验，方差不齐的指标进行独立样本秩和检验及两两比较。P<0.05表示有统计学意义。
4 结 果
4.1 取材时观察
假手术组颈动脉呈乳白色，与周围组织无明显粘连；模型组颈动脉明显增粗，呈黄白色，横切面上血管腔变小甚至接近闭塞，同对侧相应血管形成鲜明对比，与周围组织粘连明显；各治疗组动脉均有不同程度的狭窄。
4.2 颈动脉病理光镜下观察
模型组颈动脉壁内膜、中膜和外膜，三者分界清楚，动脉内膜呈均一或不均一增厚，管腔呈向心性或偏心性狭窄，管壁凹凸不平，内膜平滑肌细胞增生明显，内弹力板有不同程度破坏、断裂，中膜可见损伤，外膜增厚，腔内无血栓，管腔明显缩小；假手术组管腔面的单层血管内皮细胞连续排列，内弹力板完整，内弹力板内有极少量结缔组织，无平滑肌存在，内膜面积为零；冠心合剂各剂量组内膜均有不同程度增生，管腔狭窄，见图1～3。
4.3 I/M值测定
假手术组各时间点I/M值为0，与其他各组同时间点比较明显降低(P<0.01)；模型组各时间点I/M较其他各组同时间点明显升高(P<0.01)；冠心合剂中剂量组6周I/M值与冠心合剂大剂量组2周、4周比较，差异无统计学意义(P>0.05)；冠心合剂大剂量组2周I/M值与4周相比，差异无统计学意义(P>0.05)；其他各组各时间点两两比较I/M值差异有统计学意义(P<0.05)。冠心合剂大剂量组6周降低I/M值效果最好。
4.4 SI/SM值测定
假手术组各时间点SI/SM值为0，与其他各组同时间点比较明显降低(P<0.01)；模型组各时间点SI/SM较其他各组同时间点明显升高(P<0.01)；冠心合剂大剂量组2周SI/SM值与4周比较，差异无统计学意义(P>0.05)；其他各组各时间点间两两比较SI/SM值差异有统计学意义(P<0.05)。冠心合剂对降低SI/SM值的疗效呈剂量和时间依赖性，其中冠心合剂大剂量组6周降低SI/SM值的效果最好。
表1 冠心合剂对I/M SI/SM比值的影响(%)
注：与同处理时间的E组比较，▲P<0.05；与同处理时间的D组比较，●P<0.05；各组其他处理时间与本组2周的比较，■P<0.05。
5 讨 论
PTCA术后再狭窄(restenosis,RS)的发生影响并限制了它的疗效和应用，目前RS的发生机制及防治成为研究热点之一。Gibbons等[2]提出了血管重塑的概念，指血管直径的变化或血管壁结构的改变，分为扩张型重塑(适应性重塑、正重塑)和收缩型重塑(非适应性重塑、负重塑)，前者可以减轻或没有再狭窄，后者使狭窄加重。血管重塑贯穿于血管成形术后的全过程，是细胞增殖、死亡、迁移以及细胞外基质合成和降解所致的血管壁结构动态变化的过程，而该过程与生长因子、血管活性物质和血流动力学刺激等因素有关。
目前研究认为血管重塑的可能机制：(1)内皮功能不全：内皮细胞通过释放血管活性物质或生长因子可使其具有活性，影响细胞的增殖、凋亡、细胞外基质的沉积，直接参与血管的重塑。内皮功能不全可能是收缩性重塑一个启动因素。球囊扩张后损伤血管内皮细胞，使其舒张血管作用减弱、消失，而血小板释放的缩血管物质增加，内皮素和凝血酶受体表达增多，促使血管收缩。有研究表明，内皮功能改变越大，血管成形术后再狭窄越严重。氧化作用通过增加NO的分解而可能引起内皮功能不全，影响血管的收缩性重塑。阻止氧化作用可阻止再狭窄，抗氧化剂通过增强血管成形术后的扩张性重塑而发挥其抗再狭窄作用。(2)平滑肌细胞的增殖与凋亡：血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移最终使新生内膜形成，使血管壁结构发生了变化。VSMC凋亡与细胞增殖一样是普遍存在的生理现象，有助于维持细胞数目的恒定 ......
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