中药联合干细胞蛛网膜下腔移植对缺血再灌注大鼠脑脊液NGF的影响(2)
参见附件(12kb)。
Key words:Neural growth factor(NGF); bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs);Bone marrow mononuclear cells(BMNCs);stem cell transplantation; subarachnoid; traditional Chinese medicine(TCM); middle cerebral arterial occlusion (MCAO); cerebrospinal fluid (CSF)
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)和骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells，BMNC)通过多向组织分化、分泌多种神经营养因子(NTF)和调节免疫等机制[1-3]，促进损伤、衰老器官的结构及功能修复，成为治疗组织损伤性疾病理想的种子细胞，对脑梗塞的治疗具有重要意义。我们应用中药复方联合BMSC或BMNC蛛网膜下腔移植的方法治疗缺血再灌注脑损伤大鼠,应用定量ELISA方法，检测和比较大鼠脑脊液和脑组织内Neural growth factor(NGF)浓度变化，分析BMSC和BMNC经蛛网膜下腔移植，以及中药联合两种细胞移植治疗缺血性脑血管病的生物学机制。
1 实 验
1.1 材料
实验动物：SPF/VAF级健康雄性wistar大鼠150只(北京维通利华实验动物技术有限公司)。其中，3～4月龄，(280±20)g，140只；3～4周龄，(80±10)g，10只。主要试剂：培养基L-DMEM(美国GIBCO公司);胎牛血清(美国GIBCO公司);0.25%胰酶(美国GIBCO公司); 大鼠淋巴细胞分离液(天津血液研究所)；蝮龙抗栓丸(辽宁省血栓病中西医结合医疗中心)，主要成分为天麻、菖蒲、黄芪、丹参、川芎、蝮蛇等。主要设备：550微孔板酶标仪(美国Bio-rad公司)，MK2型洗板机(芬兰雷勃公司)，移液器(德国Eppendorf公司),倒置显微镜(日本Olympus公司)，303-3CO2培养箱(上海阳光实验仪器有限公司,DY89-11电动匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组与干预 3～4月龄雄性Wistar大鼠140只,采用PEMS 3.1数据分析软件随机数字法分为7组：1正常组、2假手术组、3模空组、4BMNC组、5中药联合BMNC组、6BMSC组、7中药联合BMSC组，每组20只。因手术意外等原因，最终纳入112只，平均每组16只。
1正常组大鼠不做处理；2假手术组大鼠操作至暴露颈内动脉、颈外动脉；3模型组、4BMNC组、5中药联合BMNC组、6BMSC组、7中药联合BMSC组建立大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注模型。造模成功者术后24h，进行蛛网膜下腔移植手术：1组不进行移植，2假手术组、3模型组枕骨大孔注射100μL 0.1MPBS溶液，4BMNC组、5中药联合BMNC组枕骨大孔注射100μL BMNCs细胞悬液(2×107个),6BMSC组、7中药联合BMSC组枕骨大孔注射100μL BMSCs细胞悬液(2×107个)。5中药联合BMNC组和7中药联合BMSC组移植当天进行中药蝮龙抗栓丸溶液灌胃，剂量为成人公斤体重的3.15倍，日1次。移植术后4天、28天分组活体取大鼠脑脊液。
1.2.2 动物模型制备 Zea Longa[4]改良线栓法，建立大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注模型(middle cerebral arterial occlusion,MCAO)：3～4月龄雄性Wistar大鼠，10%水合氯醛腹腔麻醉。分离暴露右侧颈总动脉(CCA)，颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA )，结扎CCA，在根部结扎ECA ......
Key words:Neural growth factor(NGF); bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs);Bone marrow mononuclear cells(BMNCs);stem cell transplantation; subarachnoid; traditional Chinese medicine(TCM); middle cerebral arterial occlusion (MCAO); cerebrospinal fluid (CSF)
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)和骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells，BMNC)通过多向组织分化、分泌多种神经营养因子(NTF)和调节免疫等机制[1-3]，促进损伤、衰老器官的结构及功能修复，成为治疗组织损伤性疾病理想的种子细胞，对脑梗塞的治疗具有重要意义。我们应用中药复方联合BMSC或BMNC蛛网膜下腔移植的方法治疗缺血再灌注脑损伤大鼠,应用定量ELISA方法，检测和比较大鼠脑脊液和脑组织内Neural growth factor(NGF)浓度变化，分析BMSC和BMNC经蛛网膜下腔移植，以及中药联合两种细胞移植治疗缺血性脑血管病的生物学机制。
1 实 验
1.1 材料
实验动物：SPF/VAF级健康雄性wistar大鼠150只(北京维通利华实验动物技术有限公司)。其中，3～4月龄，(280±20)g，140只；3～4周龄，(80±10)g，10只。主要试剂：培养基L-DMEM(美国GIBCO公司);胎牛血清(美国GIBCO公司);0.25%胰酶(美国GIBCO公司); 大鼠淋巴细胞分离液(天津血液研究所)；蝮龙抗栓丸(辽宁省血栓病中西医结合医疗中心)，主要成分为天麻、菖蒲、黄芪、丹参、川芎、蝮蛇等。主要设备：550微孔板酶标仪(美国Bio-rad公司)，MK2型洗板机(芬兰雷勃公司)，移液器(德国Eppendorf公司),倒置显微镜(日本Olympus公司)，303-3CO2培养箱(上海阳光实验仪器有限公司,DY89-11电动匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组与干预 3～4月龄雄性Wistar大鼠140只,采用PEMS 3.1数据分析软件随机数字法分为7组：1正常组、2假手术组、3模空组、4BMNC组、5中药联合BMNC组、6BMSC组、7中药联合BMSC组，每组20只。因手术意外等原因，最终纳入112只，平均每组16只。
1正常组大鼠不做处理；2假手术组大鼠操作至暴露颈内动脉、颈外动脉；3模型组、4BMNC组、5中药联合BMNC组、6BMSC组、7中药联合BMSC组建立大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注模型。造模成功者术后24h，进行蛛网膜下腔移植手术：1组不进行移植，2假手术组、3模型组枕骨大孔注射100μL 0.1MPBS溶液，4BMNC组、5中药联合BMNC组枕骨大孔注射100μL BMNCs细胞悬液(2×107个),6BMSC组、7中药联合BMSC组枕骨大孔注射100μL BMSCs细胞悬液(2×107个)。5中药联合BMNC组和7中药联合BMSC组移植当天进行中药蝮龙抗栓丸溶液灌胃，剂量为成人公斤体重的3.15倍，日1次。移植术后4天、28天分组活体取大鼠脑脊液。
1.2.2 动物模型制备 Zea Longa[4]改良线栓法，建立大鼠大脑中动脉栓塞2h再灌注模型(middle cerebral arterial occlusion,MCAO)：3～4月龄雄性Wistar大鼠，10%水合氯醛腹腔麻醉。分离暴露右侧颈总动脉(CCA)，颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA )，结扎CCA，在根部结扎ECA ......
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