抗毒扶正1\2号方提取液体外抗SRS病毒细胞活性作用(2)
参见附件(12kb)。
1.2.3RT-PCR法检测抗毒扶正1、2号方提取液干预下SRS病毒mRNA表达 将抗毒扶正1、2号方提取液分别设置100、20、4μg/mL 3个浓度。齐多夫定取100μg/mL。将SRS病毒细胞接种入96孔板，每孔100μL，加入100μL不同浓度的抗毒扶正1、2号方提取液，阳性对照组加入100μL齐多夫定，阴性对照组加入100μL的DMEM培养液，使各孔总体积为200μL。细胞于含5% CO2的37℃培养箱中培养48h取出，用RT-PCR法(reverse tran scription)测定SRS病毒mRNA。SRS上游引物为：5’-GAGACTGTTGGACCAGGGAA -3’，下游引物为：5’-TTGTCCTGAGATTCCCAT -3’。β-actin上游引物：5’-CTGTCCCTGTATGCCTCTG-3’，下游引物：5’-ATGTCACGCACGATTTCC-3’(由上海英俊生物技术有限公司合成)。经凝胶成像分析系统摄像，扫描PCR产物强度。以SRS密度值/β-actin密度值作为各孔细胞SRS-mRNA的相对含量。
1.2.4 统计学处理 所有数据均以 ±s表示，应用SPSS 17.0软件进行统计学处理。经正态分布检验符合正态分布，采用组间均数两两比较的方差分析和T检验判定组间差异显著性。以P<0.05为差异具有显著性意义。
2 结 果
2.1 抗毒扶正1、2号方提取液对SRS病毒细胞增殖的抑制作用测定结果
见表1～2，图1。
表1 [3H]-TdR掺入法测定抗毒扶正1、2方中药提取液对SRS病毒细胞作用cpm值
注：不同浓度药物组与细胞对照组比较，*P<0.05；**P<0.01)；不同浓度抗毒扶正方组与齐多夫定组比较，○P<0.05；○○P<0.01；不同浓度同种抗毒扶正方过滤组与未过滤组比较，△P<0.05；△△P<0.01；不同浓度抗毒扶正2号方组与抗毒扶正1号方组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01)表2 不同浓度的抗毒扶正1、2方中药提取液
对SRS病毒细胞增殖抑制率
抗毒扶正1、2号方提取液组和齐多夫定组cpm值均较阴性细胞对照组有所降低。
各抗毒扶正方组与阳性对照药物组结果比较显示：最高浓度(100μg/mL)抗毒扶正1号未过滤组cpm值较同浓度阳性对照组低，差异具显著性意义，而低浓度(0.8、0.16μg/mL)抗毒扶正1号未过滤组cpm值较同浓度阳性对照组高，差异也具有显著性意义。除最高浓度(100μg/mL)外，各浓度抗毒扶正1号过滤组和抗毒扶正2号未过滤组cpm值均较同浓度阳性对照组高，差异具有显著性意义。中、低浓度(4 、0.8、0.16μg/mL)的抗毒扶正2号过滤组cpm值较同浓度阳性对照组高，差异具有显著性意义。
同种抗毒扶正方过滤组与未过滤组结果比较显示：高浓度(100、20μg/mL)抗毒扶正1号过滤组cpm值比未过滤组cpm值有所升高，差异具有显著性意义。最高浓度(100μg/mL)抗毒扶正2号过滤组cpm值较同浓度未过滤组升高，差异具有显著性意义。
抗毒扶正1号方组与抗毒扶正2号方组结果比较显示：高浓度(100、20μg/mL)抗毒扶正2号方未过滤组cpm值较同浓度抗毒扶正1号方未过滤组cpm值高，差异具显著性意义。
2.2 抗毒扶正1、2号方提取液对SRS病毒 mRNA表达的影响
PCR产物凝胶电泳结果显示，抗毒扶正1号方100、20、4μg/mL3个浓度组和抗毒扶正2号方100μg/mL组条带相比阴性对照组较暗。
定量分析显示，100、20和4μg/mL的抗毒扶正1号方、100μg/mL的抗毒正2号方干预下的SRS病毒细胞mRNA表达较阴性对照细胞mRNA表达有所降低，见图2、表3。
注： 1：Marker； 2：阴性对照组； 3：阳性对照组；4：抗毒扶正1号方100μg/mL组； 5：抗毒扶正1号方20μg/mL组； 6：抗毒扶正1号方4μg/mL组； 7：抗毒扶正2号方100μg/mL组； 8：抗毒扶正2号方20μg/mL组； 9：抗毒扶正2号方4μg/mL组。Marker大小说明：从上至下依次为1000Bp、900Bp、800Bp…100Bp。
图2 不同浓度的抗毒扶正1、2号方中药提取液及
齐多夫定干预下的SRS mRNA表达
表3 不同浓度的抗毒扶正1、2号方中药提取液对SRS
mRNA表达的影响
3 讨 论
近30年来，中医学研究者在艾滋病体外细胞实验研究和中药干预艾滋病的动物实验研究方面做了大量工作，发现了六七十种具有不同程度地抑制HIV病毒作用的中草药及复方，并从一系列中药中提取出对HIV具抑制作用的有效成分。但由于HIV病毒的致病性强，危害程度高，一定程度上，艾滋病中医实验研究的可操作范围受到限制。本实验选用与HIV病毒同属逆转录病毒科的SRS -BⅡMuLV病毒细胞株替代HIV ......
1.2.3RT-PCR法检测抗毒扶正1、2号方提取液干预下SRS病毒mRNA表达 将抗毒扶正1、2号方提取液分别设置100、20、4μg/mL 3个浓度。齐多夫定取100μg/mL。将SRS病毒细胞接种入96孔板，每孔100μL，加入100μL不同浓度的抗毒扶正1、2号方提取液，阳性对照组加入100μL齐多夫定，阴性对照组加入100μL的DMEM培养液，使各孔总体积为200μL。细胞于含5% CO2的37℃培养箱中培养48h取出，用RT-PCR法(reverse tran scription)测定SRS病毒mRNA。SRS上游引物为：5’-GAGACTGTTGGACCAGGGAA -3’，下游引物为：5’-TTGTCCTGAGATTCCCAT -3’。β-actin上游引物：5’-CTGTCCCTGTATGCCTCTG-3’，下游引物：5’-ATGTCACGCACGATTTCC-3’(由上海英俊生物技术有限公司合成)。经凝胶成像分析系统摄像，扫描PCR产物强度。以SRS密度值/β-actin密度值作为各孔细胞SRS-mRNA的相对含量。
1.2.4 统计学处理 所有数据均以 ±s表示，应用SPSS 17.0软件进行统计学处理。经正态分布检验符合正态分布，采用组间均数两两比较的方差分析和T检验判定组间差异显著性。以P<0.05为差异具有显著性意义。
2 结 果
2.1 抗毒扶正1、2号方提取液对SRS病毒细胞增殖的抑制作用测定结果
见表1～2，图1。
表1 [3H]-TdR掺入法测定抗毒扶正1、2方中药提取液对SRS病毒细胞作用cpm值
注：不同浓度药物组与细胞对照组比较，*P<0.05；**P<0.01)；不同浓度抗毒扶正方组与齐多夫定组比较，○P<0.05；○○P<0.01；不同浓度同种抗毒扶正方过滤组与未过滤组比较，△P<0.05；△△P<0.01；不同浓度抗毒扶正2号方组与抗毒扶正1号方组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01)表2 不同浓度的抗毒扶正1、2方中药提取液
对SRS病毒细胞增殖抑制率
抗毒扶正1、2号方提取液组和齐多夫定组cpm值均较阴性细胞对照组有所降低。
各抗毒扶正方组与阳性对照药物组结果比较显示：最高浓度(100μg/mL)抗毒扶正1号未过滤组cpm值较同浓度阳性对照组低，差异具显著性意义，而低浓度(0.8、0.16μg/mL)抗毒扶正1号未过滤组cpm值较同浓度阳性对照组高，差异也具有显著性意义。除最高浓度(100μg/mL)外，各浓度抗毒扶正1号过滤组和抗毒扶正2号未过滤组cpm值均较同浓度阳性对照组高，差异具有显著性意义。中、低浓度(4 、0.8、0.16μg/mL)的抗毒扶正2号过滤组cpm值较同浓度阳性对照组高，差异具有显著性意义。
同种抗毒扶正方过滤组与未过滤组结果比较显示：高浓度(100、20μg/mL)抗毒扶正1号过滤组cpm值比未过滤组cpm值有所升高，差异具有显著性意义。最高浓度(100μg/mL)抗毒扶正2号过滤组cpm值较同浓度未过滤组升高，差异具有显著性意义。
抗毒扶正1号方组与抗毒扶正2号方组结果比较显示：高浓度(100、20μg/mL)抗毒扶正2号方未过滤组cpm值较同浓度抗毒扶正1号方未过滤组cpm值高，差异具显著性意义。
2.2 抗毒扶正1、2号方提取液对SRS病毒 mRNA表达的影响
PCR产物凝胶电泳结果显示，抗毒扶正1号方100、20、4μg/mL3个浓度组和抗毒扶正2号方100μg/mL组条带相比阴性对照组较暗。
定量分析显示，100、20和4μg/mL的抗毒扶正1号方、100μg/mL的抗毒正2号方干预下的SRS病毒细胞mRNA表达较阴性对照细胞mRNA表达有所降低，见图2、表3。
注： 1：Marker； 2：阴性对照组； 3：阳性对照组；4：抗毒扶正1号方100μg/mL组； 5：抗毒扶正1号方20μg/mL组； 6：抗毒扶正1号方4μg/mL组； 7：抗毒扶正2号方100μg/mL组； 8：抗毒扶正2号方20μg/mL组； 9：抗毒扶正2号方4μg/mL组。Marker大小说明：从上至下依次为1000Bp、900Bp、800Bp…100Bp。
图2 不同浓度的抗毒扶正1、2号方中药提取液及
齐多夫定干预下的SRS mRNA表达
表3 不同浓度的抗毒扶正1、2号方中药提取液对SRS
mRNA表达的影响
3 讨 论
近30年来，中医学研究者在艾滋病体外细胞实验研究和中药干预艾滋病的动物实验研究方面做了大量工作，发现了六七十种具有不同程度地抑制HIV病毒作用的中草药及复方，并从一系列中药中提取出对HIV具抑制作用的有效成分。但由于HIV病毒的致病性强，危害程度高，一定程度上，艾滋病中医实验研究的可操作范围受到限制。本实验选用与HIV病毒同属逆转录病毒科的SRS -BⅡMuLV病毒细胞株替代HIV ......
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