胃癌平诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的实验研究(2)
参见附件(12kb)。
1.5.2光镜标本制备 将培养的细胞调整浓度为1×105/mL，接种于内置载片的6孔培养板中，培养24h后见细胞贴壁生长状态良好，弃培养液，分别加入各组含药血清，设无含药的大鼠血清为对照组，继续培养48h后，将培养板中的载片取出，4%多聚甲醛固定30min，PBS冲洗，常规HE染色，中性树胶封片，显微镜下观察并采集图像和分析。
1.5.3 电镜标本制备 用0.25%戊二醛原位固定，用橡皮铲刮下细胞，将悬浮细胞转至离心管内，低温高速离心机离心2000r/min，10min，0.01M PBS冲洗，5min，3次，1%锇酸二次固定30min，乙醇、丙酮梯度脱水，Epon812树脂包埋，超薄切片机(LKB-V)切片，醋酸铀和柠檬酸铅双重染色，透射电镜下观察、拍片。
1.6 统计学处理
采用SPSS 10.0统计分析软件处理，实验结果以均数±标准差(±s)表示，进行方差分析(AVONA)，P<0.05为差异具有显著性意义。
2 结 果
2.1 不同浓度药物血清对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响
与对照组相比胃癌平方各浓度组、DDP组以及中西药结合组24h肿瘤细胞增殖抑制率均有统计学的意义，胃癌平方组随着浓度的提高其抑制率也显著提高，胃癌平方联合DDP组的肿瘤抑制率高于单纯给予胃癌平方高浓度组和DDP组的肿瘤抑制率(见表1)。
2.2 光镜下不同浓度药物血清对人胃癌细胞SGC-790形态影响
正常培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞贴壁生长，呈长梭形，大小均匀，核卵圆形居中，胞质清亮透明(见图1)。胃癌平方组部分细胞失去正常生长形态，长梭形细胞变圆，胞浆浓缩，核不规则，浓缩(见图2)。DDP组细胞失去正常生长形态，胞浆几乎看不到，核浓缩，染色质边集、浓缩(见图3)。胃癌平方组联合DDP组镜下形态与DDP组相似，但核更为浓缩、深染(见图4)。
表1 不同浓度药物血清作用24h对人胃癌细胞
SGC-7901增殖的抑制作用(±s)
注:与对照组比较,▲P<0.01。
2.3 电镜下观察结果
正常培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞呈长梭形，表面微绒毛明显，核仁明显，核膜连续(见图5)。胃癌平方组可见凋亡早期表面微绒毛消失，胞浆脱水，迅速发生空泡化，细胞体积缩小，线粒体肿胀并进一步空泡化，晚期核质高度浓缩成团，染色质呈边集现象；胞膜皱缩内陷，分割包裹胞浆与部分染色质，形成电镜下特异性标志的凋亡小体(见图6)。DDP组和胃癌平方加DDP组镜下也可见核质高度浓缩、染色质边集，胞膜皱缩内陷包裹胞浆与碎裂的染色质，形成凋亡小体(见图5～8)。
3 讨 论
近来中医药治疗胃癌的研究很多，不同的研究课题均证明了中医药在防治胃癌方面的潜力与优势。赵爱光等研究四君子汤在体内诱导移植性人胃癌细胞凋亡作用发现肿瘤细胞的凋亡指数与对照组比较有明显提高(P<0.05)，提示四君子汤在裸鼠体内有一定抑瘤作用[1]；王达、陈树象通过康艾注射液联合化疗治疗胃癌的临床观察，认为康艾注射液(黄芪、人参、苦参等中药加工而成的一种注射液)可切断癌细胞DNA分子链的合成，抑制癌细胞生长，并能益气扶正，增强机体免疫功能，具有止痛、止吐、止泻的作用，以及快速升高白细胞效果，并且无明显不良反应[2]。肖艳、魏品康、尤清波等通过消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中MT1-MMP表达的影响，探讨了消痰散结方对抑制胃癌浸润、转移的作用机理，其作用机理可能与其影响膜型金属蛋白酶的表达，减少金属蛋白酶对细胞外基质和基底膜的降解有关[3]。这些研究从不同的层次阐述了中药复方制剂抗胃癌的作用机理。随着反向生物学、分子生物学、细胞生物学等从分子、细胞水平上揭示肿瘤细胞生长、增殖、凋亡等规律以及功能基因组学、蛋白质组学的研究深入，中医药抗肿瘤的作用层次将会更加丰富。
本研究所采用的胃癌平方，是经临床验证治疗胃癌的有效方剂。胃癌平方体现了中医的辨证论治和整体观的思想，中医认为胃癌的发生是由于饮食、情志等方面不调，引起机体气血郁结 ......
1.5.2光镜标本制备 将培养的细胞调整浓度为1×105/mL，接种于内置载片的6孔培养板中，培养24h后见细胞贴壁生长状态良好，弃培养液，分别加入各组含药血清，设无含药的大鼠血清为对照组，继续培养48h后，将培养板中的载片取出，4%多聚甲醛固定30min，PBS冲洗，常规HE染色，中性树胶封片，显微镜下观察并采集图像和分析。
1.5.3 电镜标本制备 用0.25%戊二醛原位固定，用橡皮铲刮下细胞，将悬浮细胞转至离心管内，低温高速离心机离心2000r/min，10min，0.01M PBS冲洗，5min，3次，1%锇酸二次固定30min，乙醇、丙酮梯度脱水，Epon812树脂包埋，超薄切片机(LKB-V)切片，醋酸铀和柠檬酸铅双重染色，透射电镜下观察、拍片。
1.6 统计学处理
采用SPSS 10.0统计分析软件处理，实验结果以均数±标准差(±s)表示，进行方差分析(AVONA)，P<0.05为差异具有显著性意义。
2 结 果
2.1 不同浓度药物血清对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响
与对照组相比胃癌平方各浓度组、DDP组以及中西药结合组24h肿瘤细胞增殖抑制率均有统计学的意义，胃癌平方组随着浓度的提高其抑制率也显著提高，胃癌平方联合DDP组的肿瘤抑制率高于单纯给予胃癌平方高浓度组和DDP组的肿瘤抑制率(见表1)。
2.2 光镜下不同浓度药物血清对人胃癌细胞SGC-790形态影响
正常培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞贴壁生长，呈长梭形，大小均匀，核卵圆形居中，胞质清亮透明(见图1)。胃癌平方组部分细胞失去正常生长形态，长梭形细胞变圆，胞浆浓缩，核不规则，浓缩(见图2)。DDP组细胞失去正常生长形态，胞浆几乎看不到，核浓缩，染色质边集、浓缩(见图3)。胃癌平方组联合DDP组镜下形态与DDP组相似，但核更为浓缩、深染(见图4)。
表1 不同浓度药物血清作用24h对人胃癌细胞
SGC-7901增殖的抑制作用(±s)
注:与对照组比较,▲P<0.01。
2.3 电镜下观察结果
正常培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞呈长梭形，表面微绒毛明显，核仁明显，核膜连续(见图5)。胃癌平方组可见凋亡早期表面微绒毛消失，胞浆脱水，迅速发生空泡化，细胞体积缩小，线粒体肿胀并进一步空泡化，晚期核质高度浓缩成团，染色质呈边集现象；胞膜皱缩内陷，分割包裹胞浆与部分染色质，形成电镜下特异性标志的凋亡小体(见图6)。DDP组和胃癌平方加DDP组镜下也可见核质高度浓缩、染色质边集，胞膜皱缩内陷包裹胞浆与碎裂的染色质，形成凋亡小体(见图5～8)。
3 讨 论
近来中医药治疗胃癌的研究很多，不同的研究课题均证明了中医药在防治胃癌方面的潜力与优势。赵爱光等研究四君子汤在体内诱导移植性人胃癌细胞凋亡作用发现肿瘤细胞的凋亡指数与对照组比较有明显提高(P<0.05)，提示四君子汤在裸鼠体内有一定抑瘤作用[1]；王达、陈树象通过康艾注射液联合化疗治疗胃癌的临床观察，认为康艾注射液(黄芪、人参、苦参等中药加工而成的一种注射液)可切断癌细胞DNA分子链的合成，抑制癌细胞生长，并能益气扶正，增强机体免疫功能，具有止痛、止吐、止泻的作用，以及快速升高白细胞效果，并且无明显不良反应[2]。肖艳、魏品康、尤清波等通过消痰散结方对裸鼠MKN-45人胃癌组织中MT1-MMP表达的影响，探讨了消痰散结方对抑制胃癌浸润、转移的作用机理，其作用机理可能与其影响膜型金属蛋白酶的表达，减少金属蛋白酶对细胞外基质和基底膜的降解有关[3]。这些研究从不同的层次阐述了中药复方制剂抗胃癌的作用机理。随着反向生物学、分子生物学、细胞生物学等从分子、细胞水平上揭示肿瘤细胞生长、增殖、凋亡等规律以及功能基因组学、蛋白质组学的研究深入，中医药抗肿瘤的作用层次将会更加丰富。
本研究所采用的胃癌平方，是经临床验证治疗胃癌的有效方剂。胃癌平方体现了中医的辨证论治和整体观的思想，中医认为胃癌的发生是由于饮食、情志等方面不调，引起机体气血郁结 ......
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