未分化骨髓基质干细胞体外抑制淋巴细胞增殖反应的初步研究(1)
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摘 要：目的:研究犬未分化骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)体外抑制淋巴细胞增殖的作用。方法:从犬骨髓组织中分离获取骨髓基质干细胞，体外培养至第二代，1×10【sup】5【/sup】细胞/孔BMSCs刺激异体淋巴细胞，观察淋巴细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2ug/mL)刺激淋巴细胞后，分别以1×10【sup】2～5【/sup】细胞/孔数量的异体BMSCs加入反应体系中，观察淋巴细胞增殖抑制情况。分别以1×10【sup】2～5【/sup】细胞/孔数量的“第三者” BMSCs加入双向混合淋巴细胞反应体系中，观察淋巴细胞增殖抑制情况。通透性隔离腔培养的BMSCs加入双向混合淋巴细胞反应体系中，观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果: BMSCs刺激同种异体淋巴细胞体外增殖作用不明显；BMSCs可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖(P<0.05)；“第三者”BMSCs可明显抑制双向混合淋巴细胞反应(P<0.05)，抑制作用呈BMSCs细胞数量依赖性；隔离腔培养的BMSCs也可明显抑制双向混合淋巴细胞反应(P<0.05)。结论:犬未分化BMSCs在体外具有抑制淋巴细胞增殖的作用，具有一定的调节淋巴细胞反应的能力。
关键词：未分化骨髓基质干细胞；淋巴细胞；抑制
中图分类号：R331 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2011)04-0783-03
Abstract:Objective:To study the effect of canine undifferentiated BMSCs surpressing lymphocytes proliferation.Methods:Canine BMSCs was isolated from bone marrow tissue and culture expanded. Peripheral blood lymphocytes (PBL) were cultured with allogeneic BMSCs at dose of 1×10【sup】5【/sup】. Canine BMSCs at a dose 1×10【sup】2【/sup】,1×10【sup】3【/sup】,1×10【sup】4【/sup】,1×10【sup】5【/sup】 were added to lymphocyte reactions induced by PHA and were added to the ongoing two-way mixed lymphocyte reactions(MLR) inspectively. BMSCs cultured in transwell chamber were added to two-way mixed lymphocyte reactions. Value of CPM(count per minute)was calculated with luminenscence counter.Results:No lymphocyte response was induced by allogeneic BMSCs as stimulators.Canine BMSCs could suppress lymphocyte proliferation induced by PHA and could elicit inhibit function of mixed lymphocyte cultures in a dose dependent way. BMSCs cultured in transwell chamber could also suppress two-way mixed lymphocyte reactions.Conclusion:Undifferentiated BMSCs could suppress lymphocyte proliferative responses induced by cellular or nonspecific mitogenic stimuli and could modulate immune responses in vitro.
Key words:undifferentiated bone marrow stromal cells, lymphocytes, suppress
骨髓基质干细胞是一类存在于骨髓中具有多向分化潜能的成体干细胞，在不同的诱导环境中可分化为多种组织【sup】[1]【/sup】。我们的前期实验证明自体骨髓基质干细胞移植可以促进缺血肢体组织中的新生血管形成【sup】[2]【/sup】，但是，由于BMSCs在骨髓中含量很低，需体外扩增较长时间才能达到细胞移植所需细胞数量，不能即刻使用【sup】[1]【/sup】；同时由于存在着分离过程复杂、细胞扩增与分化随机体状况(如年龄、疾病等)不同而波动较大【sup】[3]【/sup】，上述问题使自体来源的BMSCs在应用中存在较大的局限性。近年来对BMSCs的免疫学研究表明，BMSCs具有低免疫原性，无主要组织相容性复合体的限制性【sup】[4-5]【/sup】，具有免疫调节作用【sup】[6]【/sup】等特性。BMSCs免疫学特性的研究结果为使用同种异体细胞移植治疗肢体缺血性疾病带来了新的可能。本研究观察犬未分化BMSCs体外抑制混合淋巴细胞增殖反应的能力，为进一步探讨其免疫调控机制及同种异体移植奠定基础 ......
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