四逆散对实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-4的影响(2)
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2.2 指标检测 采用双抗体夹心ELISA法测定，严格按试剂盒要求操作。
大鼠结肠黏膜组织IL-4的测定：将结肠粘膜组织从冰箱取出，加组织提取液10倍稀释、混匀，待侧；取出酶标板，依照次序对应分别加50μL的标准品于空白微孔中；分别标记样品编号，加50μL样品于空白微孔中；在样品孔中加10μL的生物素标记液；在标准品孔和样品孔中加100μL的酶标记溶液；36.3℃孵育反应65min；手工洗板6次，每次静置25s；每孔加底物A、B液各50μL；37.3℃避光孵育反应15min；每孔加50μL终止液，终止反应6min；放酶标仪中检测，采集数据。
大鼠血清IL-4的测定：从冰箱取出大鼠血清；取出酶标板，依照次序对应分别加100μL的标准品于空白微孔中；分别标记样品编号，加100μL样品于空白微孔中；在标准品孔和样品孔中加50μL的酶标记溶液；36.2℃孵育反应60min；手工洗板6次，每次静置25s；每孔加底物A、B液各50μL；36.2℃避光孵育反应15min；每孔加50μL终止液，终止反应6min；放入酶标仪中检测，采集数据。
2.3 统计 采用统计软件SPSS 10.0处理，实验数据以平均值士标准差±s表示，组间均数比较采用单因素方差分析。
3 结 果
3.1 结肠黏膜损伤大体情况 模型组大鼠病变结肠肠壁增厚，肠黏膜糜烂，黏膜表面弥漫性充血、水肿，可见出血点。各药物组大鼠结肠黏膜表现不同程度充血、水肿，可见轻度糜烂和溃疡形成。按结肠组织形态学评分标准【sup】[2]【/sup】分析各组大鼠结肠黏膜损伤情况，见表1。
3.2 结肠组织病理学及其评分 模型组大鼠病变结肠黏膜表面可见溃疡，个别深达肌层，炎症反应较重，有充血、糜烂，中性粒细胞浸润，黏膜上皮部分缺失，局部固有层腺体减少，黏膜下层血管增生，黏膜肌层不明显。其余各组均有不同程度的病变。参考结肠病理组织学评分标准【sup】[3]【/sup】，分析实验大鼠的结肠组织损伤情况，详见表1。
3.3 四逆散对实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜组织IL-4的影响 与正常组比较，模型组、四逆散组、柴芍枳组和柴芍组实验大鼠结肠粘膜组织IL-4均显著降低，P<0.01；与模型组比较，四逆散组、柴芍枳组和柴芍组均显著升高，P<0.01；另外，四逆散组与柴芍枳组之间存在显著差异，P<0.05。实验结果见表1。
3.4 四逆散对实验性UC大鼠血清IL-4的影响 与正常组比较，模型组、四逆散组、柴芍枳组和柴芍组实验大鼠血清IL-4的含量均明显降低，P<0.01；给药后，柴芍枳组与模型组比较无显著性差异，而四逆散组和柴芍组大鼠血清IL-4明显高于模型组，P<0.01，其中，柴芍组明显低于四逆散组，P<0.01。实验结果详见表1。
表1 四逆散对实验性UC大鼠IL-4的影响(n10)
注：与正常组比较，aP<0.05，bP<0.01；与模型组比较，cP<0.05，dP<0.01；与四逆散比较，eP<0.05，fP<0.01。
4 讨 论
白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4)，又称B细胞刺激因子，是Howard E等于1982年首先发现的，主要由Ⅱ型辅助T细胞(Th2)分泌，具有多种生物学功能，包括①刺激活化的B细胞分裂增殖，上调二型主要组织相容性复合体(MHC-Ⅱ)的产生，增强B细胞的抗原提呈能力。②IL-4是CD【sup】+【/sup】【sub】4【/sub】T细胞的自分泌性生长因子，能促进T细胞的增殖、活性。③抑制单核-巨噬细胞产生促炎细胞因子IL-1β和TNF-α，诱导IL-Ra的产生，提高IL-lRa/IL-lβ的比例。④诱导内皮细胞表达血管细胞间粘附分子-1(VCAM-1)，对淋巴细胞的迁移具有一定意义。
在关于UC的相关研究中，IL-4作为抗炎因子，有较强的抗炎功能，可以通过抑制其它细胞因子(如TNF-α、IL-l)的产生、抑制淋巴细胞和巨噬细胞的产生和移动、抑制超氧化物阴离子形成，来维持肠道免疫功能。临床研究表明【sup】[4]【/sup】，UC患者早期分泌的IL-4水平并无显著变化，随着疾病的不断发展，IL-4的水平逐渐降低，抑制炎症反应的作用逐渐减弱，导致体内肠道的免疫稳态遭到破坏，从而加速疾病的发展。
实验结果表明，模型组实验大鼠血清和结肠黏膜组织IL-4均显著低于正常组(P<0.01)。经灌服四逆散和柴芍后，实验大鼠血清和结肠黏膜组织IL-4明显增加，以四逆散组增加最为显著。灌服柴芍枳后，实验大鼠结肠黏膜组织IL-4虽显著增加，但明显低于四逆散组；而实验大鼠血清IL-4含量无明显变化。
由此认为，四逆散能够通过促进实验性UC大鼠IL-4的分泌上调IL-4水平来干预实验性UC ......
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