植物胰岛素的分离纯化及降糖作用的实验动物研究(1)
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摘 要：目的：探寻大量纯化苦瓜中植物胰岛素的技术方法。 方法：采用盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析三步技术纯化苦瓜中植物胰岛素，并行电泳、层析和动物实验鉴定，壳聚糖包封。 结果：目的提取物于11000处出现一条电泳带，相对迁移率与胰岛素相同；壳聚糖包封后苦瓜中植物胰岛素的降糖作用更显著。 结论：本方法可适用于大量纯化苦瓜中植物胰岛素。
关键词：植物胰岛素；壳聚糖；分离纯化
中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2011)04-0825-03
Seperation and Purification of Plant Insulin and Its Hypoglycemic Effect on the Experimental Animals
JUN Xu【sup】1【/sup】，WU Peng【sup】1【/sup】，HAN Lin【sup】1【/sup】，ZHANG Zhong【sup】1【/sup】,HUANG Zhu-qing【sup】2【/sup】
(1.Science Laboratory Center Shenyang medical college, Shenyang 110034,Liaoning,China；
2.Liaoning Vocational College of Pharmacy, Department of Health, Shenyang 110101,Liaoning,China)
Abstract:Objective: To explore a technical method to purify the plant insulin in the bitter melon.Methods:applying three-step methods to purify insulin from bitter melon these are salting out, ion exchange chromatography and gel filtration chromatography. And than using electrophoresis chromatography, animal experiments and chitosan envelopment methods to identify it.Results:The extracts appeared electrophoresis band at the 11000 molecular weight, and had the same relative mobility with insulin. The plant insulin from the bitter melons has the hypoglycemic effect significantly after the chitosan envelopment methods. Conclusion:To stabilized extract the plant insulin from the bitter melon can depend on this method mentiond in this paper.
Key words:Plant insulinChitosanPurifay
现代医学证明苦瓜作为一种功能食品，具有降低血糖，抗病毒、抗肿瘤，增强机体免疫力等作用，被认为是新一代疗效高、副作用小的降血糖天然药物的典范【sup】[1]【/sup】。同时，更因为苦瓜含有一种降低血糖的多肽——植物胰岛素，使人们对从中研制胰岛素的口服替代品充满了希望。目前，业已可通过有机酸、醇、丙酮沉淀、薄层层析、盐析、阳离子交换层析等传统或改良的实验室分离方法【sup】[2-3]【/sup】，从苦瓜中获得纯度较高的植物胰岛素。然而，程序繁杂、实验技术要求高、应用样品量小，仍是这类方法难以实现大量纯化苦瓜中植物胰岛素的瓶颈。我们经过研究与改进，建立了通过盐析、阴离子交换层析、凝胶过滤等技术大量纯化苦瓜中植物胰岛素的程序化制备过程，并形成壳聚糖包封的口服制剂，进而为苦瓜中植物胰岛素广泛、有效的应用奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料
新鲜苦瓜(市售)。A缓冲液：0.1M/L Tise-HCl pH7.0；B缓冲液：0.1M/L PB pH7.0(均为国药集团化学试剂沈阳有限公司提供)。
1.2 仪器
DEAE-Sepharose FF(美国GE公司)；Sephdex G75(美国GE公司)；FPLC(美国GE公司)；核酸蛋白计算器(美国GE公司)；四氧嘧啶糖尿病大鼠(北京军科院动物研究所)；冷冻高速离心机(日本HITACHI公司)；血糖测定仪(国产)。
1.3 方法
1.3.1 苦瓜中植物胰岛素的纯化 新鲜苦瓜500g去籽，-20℃冷冻8h以上，组织破碎仪粉碎，苦瓜粉末用100mL A缓冲液采用微波震荡15min溶解。溶解后12000r/min 4℃离心20min，收集上清。
取上清，测量体积，按最终浓度30%(0.176g/mL)加入硫酸氨，边加边搅拌，致完全溶解后，再4℃搅拌2h，静置1h。12000r/min 4℃离心20min，弃上清，沉淀用20mL A缓冲液溶解，5000透析袋对A缓冲液透析过夜，期间更换一次透析外液。透析后，收集透析内液12000r/min 4℃离心20min ......
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