湘A 1号\2号对免疫缺陷动物免疫保护作用的研究(2)
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Key words:Xiang A NO 1Xiang A NO 2cyclosporine Aimmune
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染所致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)是全球性的传染病，严重威胁人类的身心健康，艾滋病已成为一个严重的社会问题，其防治刻不容缓。高效抗逆转录病毒治疗(HAART)是治疗AIDS的主要方法，HAART显著降低了艾滋病相关疾病的发病率和死亡率，提高患者的生活质量，延长患者的寿命，但不能从根本上根除HIV。寻找安全有效的具有免疫调节功能的天然药物已成为防治AIDS的重要研究方向【sup】[1-2]【/sup】。在成功建立符合HIV致病机制的动物模型和研究湘A1号、2号对免疫缺陷模型小鼠T细胞亚群的影响的基础上【sup】[3-4]【/sup】，我们进一步研究了湘A 1号、2号对免疫缺陷动物的免疫保护作用，现将结果进行报告与分析。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 昆明系雄性小白鼠，体质重(18±22)g，年龄6～8周，购自湖南中医药大学动物实验中心，动物合格证号：SCXK(湘)2002001。
1.1.2 药物与试剂 湘A1号、湘A2号由湖南中医药大学第一附属医院制备，规格15g/包；贞芪扶正颗粒为甘肃扶正药业科技股份有限公司产品，产品批号070932，规格5g/包；环孢菌素A (CSA)为瑞士诺华大药房产品，产品批号：S00117A，规格：每支250mg/5mL，用时以无菌生理盐水稀释，冰箱保存；5%鸡红细胞混悬液、1%淀粉自制。
1.2 方法
1.2.1 造模与分组给药 取100只实验小鼠，除正常对照组外，其余小鼠腹腔注射环孢菌素A，隔日1次，共注射3次，正常对照组同步腹腔注射生理盐水【sup】[ 3]【/sup】。每天定期观察动物的一般症状，模型动物逐渐出现食欲减退、反应迟钝、毛失光泽等症状，初步判断模型建立成功；末次注射后第2天处死小鼠10只检测相关指标以评判模型。评判模型成功的当天分组,并经灌胃给药。实验设正常对照组、模型组对照组、阳性药物对照组、湘A1号观察组(低、中、高剂量共3组)、湘A2号观察组(低、中、高剂量共3组)，每组10只。湘A1、2号观察组：根据成人用药量30g/60kg体质重，按体表面积换算成小鼠的等效剂量为中剂量(0.087g/20g·d)，低剂量为中剂量的1/3倍，高剂量为中剂量的3倍；阳性对照药物(贞芪扶正颗粒)组，按成人用药量10g/60kg换算成小鼠的等效剂量(0.029g/20g)【sup】[5]【/sup】。每次0.7mL/只，1日2次，连续灌胃1周。模型组同步予安慰剂灌胃，正常组给予蒸馏水灌胃。
1.2.2 指标测定 ①药物对免疫缺陷动物胸腺重量指数、肺重量指数、肝重量指数的影响 给药结束后第2天称动物体重，眼眶放血法处死小鼠，解剖取出胸腺、肺、肝等脏器，于电子分析天平上称湿重。将器官重量(mg)除以体质重(g)得器官系数，比较组间差异的显著性。②药物对免疫缺陷的动物腹腔巨噬细胞吞噬功能影响 于停药后的第1天动物腹腔注射无菌的1%淀粉2mL，20h后腹腔注射5%RBC鸡红细胞悬液2mL，1h后取腹腔液推片，自然干燥，甲醇固定，瑞氏染色、镜检，计算吞噬百分率(%)吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的吞噬细胞数×100和吞噬指数被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。③药物对免疫缺陷的动物胸腺、脾脏、肺组织病理变化的影响 于停药后第2天，眼眶放血法处死小鼠，剖取胸腺、脾脏、肺脏、小肠组织，用10%甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色，光学显微镜下观察其组织的病理改变。
1.2.3 统计学分析 采用SPSS 12.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间差异比较用单因素方差分析，差异有统计学意义时再用最小显著差值法 (LSD)进行两两比较。P≤0.0 5认为有统计学意义。
2 结 果
2.1 药物对免疫缺陷动物胸腺重量指数、肺重量指数、肝重量指数影响的检测结果
由表1可知：模型组动物胸腺指数下降，肺重量指数、肝重量指数增大，与正常组比较，差异显著(P<0.0)。与模型组比较，湘A1号低、中、高剂量组及湘A2号中、高剂量组能显著提高免疫缺陷动物的胸腺重量指数(P<0.05或<0.01)；湘A1号高剂量组、湘A2号中、高剂量组能显著降低免疫缺陷动物的肺重量指数(P<0.01)；湘A1号、湘A2号低、中、高剂量组均能显著降低肝重量指数(P<0.05或<0.01)。※其中湘A1号高剂量组对胸腺指数、湘A2号中剂量组对肺重指数、肝重指数的效果优于阳性对照组(P<0.05)。
表1 药物对免疫缺陷动物胸腺重量指数、肺重量指数、肝重量指数的影响(n10，±s)
注：与正常组比较，※※P<0.01；与正常组比较，※P<0.05；与模型对照组比较，**P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05；与阳性药物对照组比较，△△P<0.01；与阳性药物对照组比较，△P<0.05。
2.2 药物对免疫缺陷的动物腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的结果
由表2可知：模型组动物腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数下降，与正常组比较，差异显著(P<0.01)。与模型对照组比较，湘A1号、湘A2号低、中、高剂量组均能提高免疫缺陷动物腹腔巨噬细胞吞噬百分率(P<0.01)，其中湘A2号中、高剂量组效果优于阳性对照组；湘A1号中、高剂量及湘A2号低、中、高剂量组能明显提高免疫缺陷动物腹腔巨噬细胞的吞噬指数(P<0.01或P<0.05)，其中湘A1号高剂量组和湘A2号中剂量组的效果优于阳性对照组。
表2 药物对免疫缺陷动物腹腔巨噬
细胞吞噬功能的影响(±s，n10)
注：与正常组比较， ※※P<0.01；与正常组比较，※P<0.05；与模型对照组比较，**P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05；与阳性对照组比较，△△P<0.01；与阳性对照组比较，△P<0.05。
2.3 药牨对免疫缺陷的动物胸腺、脾脏、肺和小肠组细病理变化影响的结果
由图1可知：与正常组比较，模型组动物胸腺萎缩、坏死、局部脂肫变性、皮质增厚、可见其中有淋巴小结样结构；脾脏代偿性白髓增多，脾小体增多变大，红髓中可见大量多核巨噬细胞；肺泡间质增厚、充血、水肿、有大量淋巴细胞浸润，有局灶性炎症改变；導肠绒毛紊乱、固有层淋巴细胞增多、肠腔内有大量上皮脱落细胞。与模垊对煦组比较，湘A1高剂量组胸腺周围皮质与髓质比例基本正常，皮质中未见淋巴小栶结构；脿脏红髓与白髓质比例基本正常，红髓中有少野的巨噬细胞，未见特异性改变；肺泡间质无增厚、充血、水肿，肺间质少量淋巴细胞浸润，无炎症改变；小肠绒毛基本正常，肠腔内有少量上皮脱落。湘A2号中剂量组胸腺皮质与髓质比例基本正常，未见胸腺小体退行性变化；脾脏红髓中有少量多核巨噬细胞；肺组织结构基本正常；小肠绒毛基本正常 ......
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