三清安眠汤剂的镇静催眠作用及作用机制探讨(2)
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2.3 仪器
ZL-2型程控自主活动仪：中国医学科学院协和药物研究所生产。
AL104-IC电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
L-ECD-6A电化学检测器：SHIMADZΜ, Japan.
ODS-C18色谱柱 (5μ,C【sub】18 【/sub】,200×4.6mm)：Diamonsil【sup】TM【/sup】(钻石)，迪马公司
DY89-I型电动玻璃匀浆机：宁波新芝科器研究所
CDMC-4A色谱数据处理仪：上海计算技术研究所
7125高压六通进样阀：RHEODYNE,Μ.S.A.
3 方 法
3.1 最大耐受试验【sup】[1,2]【/sup】
取小鼠20只，将小鼠随机分为空白组和给药组，每组10只，雌雄各半。于实验前12h禁食不禁水，给药组灌胃给予225g/kg的三清安眠汤剂(相当于17倍临床等效量，是浓缩所能达到的最大浓度)，给药容量为0.4mL/10g(小鼠最大给药体积)，空白组同法给予蒸馏水。在(20±2)℃，相对湿度50%～70%的条件下饲养7天，记录小鼠毒性反应及死亡数。
3.2 对自主活动的影响
3.2.1 对正常小鼠自主活动的影响【sup】[2,3]【/sup】 取小鼠60只，测其10min内的自主活动数，根据该值将小鼠分为空白组、安定组和3个给药组即SQ【sub】1/3【/sub】组、SQ【sub】1【/sub】组、SQ【sub】3【/sub】组，保证每组自主活动初始均值没有统计学差异。每组8～12只不等，雌雄各半。SQ【sub】1/3【/sub】、SQ【sub】1【/sub】、SQ【sub】3【/sub】组分别给予5、15、45g/kg的三清安眠汤剂，空白组和安定组给予蒸馏水，按0.2mL/10g体重灌胃给药两周。末次给药时，安定组灌胃给予0.004g/kg安定，末次给药35min后，放入小鼠自主活动仪中适应10min后，测试10min小鼠的自主活动值。
3.2.2 对给予苯甲酸咖啡因致中枢兴奋小鼠自主活动的影响【sup】[4,5]【/sup】 取小鼠60只，分为空白对照组、模型组、各给药组，每组8-12只不等，雌雄各半。SQ【sub】1/3【/sub】、SQ【sub】1【/sub】、SQ【sub】3【/sub】组分别给予5、15、45g/kg的三清安眠汤剂，空白组和模型组给予蒸馏水，按0.2mL/10g体重灌胃给药两周，末次给药前两天适应ZIL-2型程控自主活动仪，每天同一时段，每天一次，适应两天，每次15min。末次给药35min后，放入小鼠自主活动仪中适应仪器10min，之后模型组、各给药组按0.1mL/10g苯甲酸咖啡因(10mg/kg)【sup】[6-7]【/sup】，再放入自主活动仪测试10min。
3.3 三清安眠汤剂与戊巴比妥钠的协同作用
3.3.1 三清安眠汤剂对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响【sup】[1,2]【/sup】 取小鼠60只，分为空白组、安定组和3个给药组即SQ【sub】1/3【/sub】组、SQ【sub】1【/sub】组、SQ【sub】3【/sub】组，每组12只，雌雄各半。SQ【sub】1/3【/sub】、SQ【sub】1【/sub】、SQ【sub】3【/sub】组分别给予5、15、45 g/kg的三清安眠汤剂，空白组和安定组给予蒸馏水，按0.2mL/10g体重灌胃给药3周。末次给药时，安定组灌胃给予0.004g/kg安定，45min后，各组腹腔注射浓度为35mg/kg的戊巴比妥钠(阈下剂量),记录小鼠入睡的个数。翻正反射消失达1min以上者即为入睡。
3.3.2 三清安眠汤剂对阈上戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响【sup】[1,2]【/sup】 取小鼠60只，分为空白组、安定组和3个给药组即SQ【sub】1/3【/sub】组、SQ【sub】1【/sub】组、SQ【sub】3【/sub】组，每组12-16只不等，雌雄各半。SQ【sub】1/3【/sub】、SQ【sub】1【/sub】、SQ【sub】3【/sub】组分别给予5、15、45g/kg的三清安眠汤剂，空白组和安定组给予蒸馏水，按0.2mL/10g体重灌胃给药两周。末次给药时，安定组灌胃给予0.004g/kg安定，45min后，各组腹腔注射浓度为50 mg/kg的戊巴比妥钠(阈上剂量),记录小鼠睡眠持续时间。
3.4 三清安眠汤剂对大鼠海马5-HT含量的影响
3.4.1 动物的处理及样品的制备 取大鼠24只，随机分为空白组、SQ【sub】1【/sub】组、SQ【sub】3【/sub】组，每组8只。SQ【sub】1【/sub】组、SQ【sub】3【/sub】组分别给予11.7、35 g/kg的三清安眠汤剂，空白组给予蒸馏水，按0.2 ml/10g体重灌胃给药2周。
实验大鼠末次给药45min后，快速断头取脑，冰盘上分离出海马，称重，加入冰冷的0.4mmol/L高氯酸溶液250(l，匀浆，高速离心(4℃，12000rpm,20min)，取上清液20(l进样，用HPLC-ECD系统测定5-HT的含量。
3.4.2 5-HT测定的色谱条件 色谱柱：Diamonsil【sup】TM【/sup】,ODS-C18,5μ,C【sub】18 【/sub】；日本岛津10A液相恒流泵，流速1.0mL/min；SHIMADZΜ L-ECD-6A电化学检测器，电化学检测器工作电压:+0.70v检测灵敏度：4nA；柱温：25℃；进样量：25μL；CDMC-4A色谱数据处理仪；流动相：100mmol/L乙酸钠，85mmol/L柠檬酸缓冲液，0.2mmol/LEDTANa【sub】2【/sub】，10%甲醇 ......
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