三清安眠汤剂的镇静催眠作用及作用机制探讨(3)
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表1 三清安眠汤剂给药两周后对正常小鼠
自主活动数的影响(mean±S.E.M)
注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01。
4.2.2 对给予苯甲酸咖啡因致中枢兴奋小鼠自主活动的影响 三清安眠汤剂灌胃给药两周，末次给药后45min后，各组小鼠10min内自主活动数测定结果见表2。由表2可见，三清安眠汤剂组与模型组比较，1/3倍临床等效量对小鼠的自主活动没有显著影响，1倍、3倍临床等效量能显著减少苯甲酸咖啡因致中枢兴奋小鼠的自主活动(P<0.01)。
表2 三清安眠汤剂给药两周后对苯甲酸咖啡因
导致的小鼠自主活动增加的影响
注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组相比， ##P<0.01。
4.3 三清安眠汤剂与戊巴比妥钠的协同作用
4.3.1 三清安眠汤剂与阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响 三清安眠汤剂连续给药三周后对给予阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡只数的影响见表3。由表3可见，三清安眠汤剂组与空白组比较，1/3倍临床等效量对小鼠的睡眠只数没有显著影响，1倍、3倍临床等效量能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡的只数(P<0.01)。
表3 三清安眠汤剂给药三周后对阈下剂量
戊巴比妥钠小鼠催眠作用的影响
注：与空白组比较，*P<0.05，***P<0.001。
4.3.2 三清安眠汤剂与阈上戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响 三清安眠汤剂连续给药两周后对给予阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠持续时间的影响见表4。由表4可见，三清安眠汤剂组与空白组比较，1/3倍临床等效量对小鼠的睡眠持续时间没有显著影响，1倍、3倍临床等效量能显著增延长阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠持续时间(P<0.01)。
表4 三清安眠汤剂给药两周后对阈上剂量
戊巴比妥钠小鼠睡眠持续时间的影响
注：与空白组比较，*P<0.05,**P<0.01。
4.4 三清安眠汤剂对大鼠海马5-HT含量的影响
4.4.1 应用HPLC-电化学检测5-HT的线性关系 结果如Fig. 1所示，在HPLC结合电化学检测的色谱条件下，5-HT标准品含量在0.025、0.05、0.2、0.5、1(g/mL之间线性关系良好。以峰面积(A)为纵坐标，5-HT标准品溶液的浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。
4.4.2 5-HT标准品及样品的色谱图 在应用HPLC结合电化学检测的色谱条件下，Fig.2A为5-HT标准品色谱图,Fig.2B为5-HT样品色谱图
4.4.3 大鼠海马5-HT含量测定结果 三清安眠汤剂连续给药两周后对大鼠海马5-HT含量的影响见表5。由表 5可见，三清安眠汤剂给药组与空白组比较，1倍和3倍临床等效量能显著增加大鼠海马5-HT含量(P<0.05，P<0.01)。
表5 三清安眠汤剂连续给药两周后各组
每克海马中5-HT的含量
注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01。
5 讨 论
三清安眠汤剂是一种口服的中药复方制剂，所以在本实验中采取了灌胃的给药方式。在急性毒性中，选择了做最大耐受试验，主要是考虑到受试药三清安眠汤剂是中药复方制剂，采用灌胃的方式给药，要保证药液的黏稠度能顺利通过灌胃器针头，且在保证药效的前提下三清安眠汤剂所能达到的最大浓度为17倍临床等效量。
三清安眠汤剂连续灌胃给药14天后能够显著减少正常小鼠自主活动，提示三清安眠汤剂对正常小鼠有显著的镇静作用。
为研究三清安眠汤剂的镇静催眠作用，本实验选取了考察三清安眠汤剂对给予苯甲酸咖啡因致中枢兴奋小鼠自主活动的影响【sup】[4-5]【/sup】。选定苯甲酸咖啡因剂量是10mg/kg的原因：(1)查阅大量英文文献，据文献将苯甲酸咖啡因剂量定为10、20mg/kg【sup】[6,7]【/sup】。(2)用苯甲酸咖啡因(10、20mg/kg)做预试验，结果两剂量都能显著增加小鼠自主活动，但20mg/kg作用比10mg/kg强，这点与英文文献也相符。并且，实验室以前用苯甲酸咖啡因增加小鼠自主活动的剂量也是10mg/kg。(3)最后选定观察：三清安眠汤剂给药两周后对苯甲酸咖啡因(10mg/kg)导致的小鼠自主活动增加的影响。
三清安眠汤剂临床给药周期最少为两周，故在自主活动和对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响中给药周期为两周。在对阈下戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响中，给药两周时，没有观察到显著的药效，故延长给药时间到三周，结果发现1倍和3倍临床等效量的三清安眠汤剂能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的只数，这提示1倍和3倍临床等效量的三清安眠汤剂具有显著的安眠作用。
1969年jouvet and koella分别提出了5-羟色胺致眠学说【sup】[8]【/sup】，提出5-羟色胺是与睡眠密切相关的中枢神经递质。实验证明,降低脑内5-HT会引起失眠,失眠恢复同脑内5-HT水平的恢复相平衡。说明5-HT在睡眠中起作用。另外,脑内NA下降及5-HT神经元兴奋可产生镇静作用【sup】[9,10]【/sup】。海马中含有许多与睡眠调节相关的神经递质,如5- HT【sup】[11]【/sup】、NE等海马与中缝核、杏仁核、蓝斑、丘脑、下丘脑等调节睡眠的神经结构间有着复杂的神经联系【sup】[12]【/sup】,所以，本实验选取高效液相结合电化学检测器测定给药两周后大鼠海马处5-HT含量的变化。
小鼠实验的结果表明，三清安眠汤剂1倍和3倍临床等效量对正常小鼠和给予咖啡因的中枢兴奋小鼠的的自主活动有显著的抑制作用，且其与阈上、阈下剂量的戊巴比妥钠引起的正常小鼠的催眠有显著的协同作用。所以，在探讨三清安眠汤剂对大鼠海马5-HT含量的影响时，也采用了这两个剂量，结果表明，与空白组相比，三清安眠汤剂1倍和3倍临床等效量给药两周后能够引起大鼠海马5-HT含量的显著升高。
综上推测三清镇静催眠药对海马5-HT的调节作用可能是其产生镇静催眠的机制之一。
参考文献
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[3] 涂人顺,张国玺,孙斌辉.关于小鼠自主活动规律的研究[J].中国药理学通报,2002,18 (4):464.
[4] Kaplan G B, Greenblatt D J,Leduc B W,Thompson M L.Shader R I lationship of plasma and brain concentrations of caffeine and metabolites to benzodiazepine receptor binding and locomotor activity[J]. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics ......
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