大鼠肾缺血-再灌注后p38MAPK蛋白表达的变化及银杏达莫注射液对其的影响(3)
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表2 各组大鼠肾组织p-JNK表达的
变化及比较(n10，±s)
注：与对照组比较:☆☆P<0.01与模型组比较:△P<0.05，△△P<0.01。
2.3 肾组织SOD、MDA与p-p38MAPK及p-p38MAPK与血清BUN、Cr各参数间的相互关系 直线相关分析显示：SOD与p-p38MAPK之间呈明显负相关，相关系数r为-0.640，P<0.01； MDA与p-p38MAPK值之间呈明显正相关，相关系数r分别为0.651，P<0.01；p-p38MAPK与BUN、Cr之间呈明显正相关，相关系数r分别为0.473、0.461，P<0.01。
2.4 肾组织病理改变 肉眼下：对照组肾皮质髓质颜色正常；模型组肾皮质较苍白，髓质颜色呈暗红色；银杏达莫注射液处理组皮质轻度苍白，髓质可见轻度淤血水肿，而高中低三组剂量之间无明显差异。电镜下：对照组近曲小管线粒体变化不明显,无细胞溶解,足突清晰可见，足细胞未见明显变化(图2、7、12、17)。模型组近曲小管上皮细胞大量溶解，呈现空泡化，产生大量吞饮小泡，形成吞噬体，部分线粒体肿胀，形状不规则，部分线粒体基质浓缩，外腔扩大，嵴稀疏散乱，大量足突融合，部分基底膜增厚不均，出现局灶性隆突，足细胞空泡化，胞核固缩，细胞中线粒体部分肿胀变形，部分基质浓缩(图3、8、13、18)。银杏达莫注射液处理组也出现近曲小管部分上皮细胞溶解，呈现空泡化，有吞饮小泡和吞噬体的产生，部分线粒体肿胀变形，部分线粒体基质浓缩，无外腔扩大，嵴清晰可见，无稀疏散乱等改变，部分足突融合，基底膜基本完整，无变形增厚等改变，足细胞结构完整，足细胞中的线粒体也有部分肿胀变形及基质浓缩改变，但程度都较模型组轻(图4、5、6、9、10、11、14、15、16、19、20、21)。
3 讨 论
肾缺血-再灌注损伤是缺血性急性肾功能衰竭的重要损伤环节，也是肾移植中影响移植肾早期功能恢复的主要因素、病理机制非常复杂。RIRI与自由基的产生密切相关【sup】[6-7]【/sup】。研究表明【sup】[8-9]【/sup】，在肾缺血-再灌注过程中产生大量氧自由基(oxygen free radical，OFR)，这些自由基攻击生物膜的多元不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，生成脂质过氧化物(lipid peroxidation，LPO)，LPO可分解产生丙二醛(malondialdehyde，MDA)。在IRI阶段不仅产生大量氧自由基，而且清除自由基的酶类活性也受到抑制，更加重了大量自由基在体内的蓄积。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是超氧阴离子自由基的清除剂，可抑制自由基引起的脂质过氧化反应。
p38MAPK通路是MAPKs的亚家系，主要在细胞应激(如紫外线照射、高渗、机械应激等)条件下被激活，活化后的p38MAPK以转位的方式进入细胞核，激活其下游的底物。已有研究发现氧自由基参与了p38MAPK的激活【sup】[10]【/sup】，本实验相关分析的结果可知，SOD活性与p-p38MAPK表达存在明显的负相关，而BUN、Cr、MDA含量与p-p38MAPK表达存在明显的正相关，与已有的研究结果相符。而缺血缺氧本身也可以诱导p38MAPK的活化【sup】[11]【/sup】， p38MAPK都对炎症因子、热休克蛋白和ROS介导的细胞应激很敏感【sup】[3]【/sup】，p38MAPK的活化启动了细胞凋亡的发生，进而损伤肾脏的组织结构和功能。本实验发现，大鼠肾缺血-再灌注时p-p38MAPK表达明显上调，同时伴随着肾组织结构的严重损伤和肾功能的不同程度减退；而且p-p38MAPK与BUN、Cr之间呈明显正相关关系，提示p38MAPK的活化介导了RIRI的发生、发展。
银杏达莫注射液的主要有效成分为银杏总黄酮(9.0～11.0mg)及双嘧达莫(3.6～4.4mg)，具有拮抗血小板活化因子，抗血栓，扩张血管、增加组织血流量、抗氧化，抗自由基作用，降低血中胆固醇及改善微循环等作用，可以通过扩张肾小球的出球小动脉，改善肾脏的微循环来改善肾脏的缺血缺氧状态。因而可以改善血液流动特性，防止血栓形成，改善组织器官的血供。本研究结果发现：给予银杏达莫注射液3个剂量0.9、1.8、3.6mL/kg治疗后，肾组织MDA浓度降低和SOD活性增强，同时p-p38MAPK蛋白表达下调，肾组织损伤一定程度的减轻及肾功能指标不同程度的改善，而3个剂量组的结果虽有个别指标有差别，但无统计学意义。表明小剂量的银杏达莫注射液就可达到保护肾脏缺血再灌注损伤的作用。同时，实验结果也表明：银杏达莫注射液可通过清除体内氧自由基，降低脂质过氧化反应程度，从而减少p38MAPK蛋白的磷酸化，进而对缺血-再灌注损伤肾发挥一定程度的保护作用。
参考文献
[1] Xia Z, Hollyoak M, Barrow R, et al. Superoxide dismutase and leupeptin prevent delayed reperfusion injury in the rat small intestine during burn shock[J]. Journal of Burn Care and Rehabilitation，1995，16:111.
[2] Thurman J. Triggers of inflammation after renal ischemia/reperfusion[J]. Clinical immunology，2007，123(1):7-13.
[3] Dong J, Ramachandiran S, Tikoo K, et al. EGFR-independent activation of p38 MAPK and EGFR-dependent activation of ERK1/2 are required for ROS-induced renal cell death[J]. American Journal of Physiology- Renal Physiology，2004，287(5):F1049 ......
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