HPLC测定白带丸中盐酸小檗碱的含量
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摘 要：目的：建立白带丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定，用C【sub】18【/sub】柱(150×4.6mm,5μm)，以乙腈-0.05mol/L三乙胺溶液(用磷酸调PH值至3.0)(35∶65)为流动相，检测波长347nm。结果：盐酸小檗碱的线性范围为0.060～0.300μg；相关系数r0.9994，平均回收率为99.634%，RSD0.45%(n5)。结论：所用方法测定样品灵敏度高，重复性好，能有效地控制白带丸的质量。
关键词：白带丸；盐酸小檗碱；HPLC
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2011)04-0905-02
Determination of Berberine in Baidai Wan by HPLC
ZHANG Ling-rong
(People’s Hospital of Lengshuijiang City Lengshuijiang, Lengshuijiang 417500,Hunan,China)
Abstract:Objective：To establish method for the determination of berberine in Baidai Wan； Methods：The separation was carried out on C 18(150×4.6mm,5μm) column；The mobile phase was composed of acetonitrile-0.05mol/L triethylamine (35∶65)，Detection wavelength was 347nm；Results：The linear range of berberine was 0.060μg～0.300μg (r0.9994)；Average recovery was 99.634% (RSD0.450%n5).Conclusion：This method was accurate、rapid 、reproducible and suitable for the quality control of this preparation.
Key words:Baidai WanBerberineHPLC
收稿日期：2010-11-09
作者简介：张玲容(1972-)，女，湖南冷水江人，副主任中药师、执业药师，研究方向：医院药学研究。
妇科良药白带丸为纯中药制剂,自1977年以来，一直为中国药典所收载。由椿皮、黄柏、白芍、当归、香附(醋制)五味原料组成，具有清湿热,止带下的功效，用于湿热下注,赤白带下。我们用高效液相色谱法对白带丸中黄柏含有的有效成分盐酸小檗碱进行了含量测定研究。现报道如下。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪，SPD-10Avp型紫外检测器，N-2000色谱数据工作站。FA1004电子分析天平(上海良平仪表有限公司)，KQ3200超声清洗器(中国昆山市超声仪器有限公司)。
试剂及试样:盐酸小檗碱对照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208)、乙腈为色谱纯、其余试剂均为分析纯、水为自制重蒸水。
2 含量测定
2.1 色谱条件【sup】[1]【/sup】 色谱柱：A.T.Chrom C【sub】18【/sub】(150×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.05mol/L三乙胺溶液(用磷酸调PH值至3.0)(35∶65)为流动相，检测波长为347nm；柱温：室温；流量：1.0mL/min。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥5小时的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.02mg溶液，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取白带丸20g，将样品研细，取约10g精密称定，置100mL量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约80mL，超声处理30min，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。弃去初滤液，取续滤液1mL加盐酸-甲醇(1∶100)溶液稀释至25mL制得供试品溶液。
2.4 检测波长的选择 取盐酸小檗碱对照品溶液(100μg/mL)，以流动相为空白在210～500nm范围内绘制吸收光谱图。结果：盐酸小檗碱最大吸收波长为347nm。当采用347nm为检测波长时，盐酸小檗碱的检测灵敏度高，杂质峰较少，基线平稳，杂质均不干扰测定。综上因素，选择347nm为其检测波长。
2.5 系统适用性试验【sup】[2]【/sup】 分别精密吸取对照品溶液，白带丸供试液，缺黄柏的阴性样品供试液各20μL，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定，结果理论塔板数以盐酸小檗碱的吸收峰计算均不低于5000，缺黄柏的阴性样品供试液在对照品溶液的出峰时间处无峰出现。
2.6 线性关系考察【sup】[3]【/sup】 精密吸取上述对照品溶液适量，稀释成0.0030、0.0060、0.0090、0.0120、0.0150mL/mg的溶液，分别吸取20μL在上述色谱条件下，进样，测定峰面积，结果见表1。以峰面积对进样量(μg)回归，得回归方程A2317632 C–13891,相关系数r0.9994，表明盐酸小檗碱在0.06μg～0.30μg之间线性关系良好。
表1 盐酸小檗碱线性关系考察结果
2.7 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液(每1mL含盐酸小檗碱0.010mg)，按上述色谱条件操作，重复进样5次，分别进样20μL，测定其峰面积。结果见表2。精密吸取供试品液20μL，连续进样5次，记录峰面积，结果见表3。其峰面积的RSD分别为1.58%和1.62，表明本法精密度良好。
表2 精密度试验结果
表3 供试品精密度试验结果
2.8 稳定性试验 取供试品溶液(批号：090801)，室温放置，依上述方法每隔一定时间测定一次，结果见表4，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.48%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
表4 稳定性试验结果
2.9 重复性试验 取同一批供试品(批号：090803)，平行精密称取5份，依法测定，结果见表5，盐酸小檗碱含量的RSD为1 ......
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