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编号:12224829
冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤炎性因子水平的影响(2)
http://www.100md.com 2011年12月1日 《中华中医药学刊》 2011年第12期
     2 实验方法

    2.1 兔血清制备

    取健康新西兰大白兔,雄性,体重在1.8~2.2kg之间,随机分成5组:每组3只,①正常组,生理盐水,10mL/kg;②维拉帕米组,0.02g/kg,10mL/kg;③冠心平小剂量组,2.8g/kg,10mL/kg;④冠心平中剂量组,5.6g/kg,10mL/kg;⑤冠心平大剂量组,11.2g/kg,10mL/kg。按上述剂量灌胃给药,连续3天,最后一天连续2次灌胃,中间间隔2h,末次给药后2h,耳缘静脉采血,放置1h,离心(2500r/min)30min,吸取血清,56℃、30min灭活。经0.22μm滤膜抽滤除菌,分装,-20℃保存备用。

    2.2 血管内皮细胞的培养

    细胞生长至80%融合,弃去旧的培养液,用PBS轻轻荡洗2次,加入2mL消化液,37℃温育2min,显微镜下见细胞圆缩、间隙增大,弃去消化液,用PBS轻轻荡洗1次,加入适量完全培养液,吹打,使之成为单个悬浮细胞,1∶ 2分瓶,放入培养箱内培养。

    2.3 造模与给药\[6\]

    取含药血清,加入到不完全培养液中,使之浓度为10%。取100μmol/L H2O2作为造模浓度\[7\]。

    分组:①正常对照组,10%空白血清培养液;②模型对照组 ......
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