冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤炎性因子水平的影响(1)
摘 要：目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中TNF-α与IL-1水平的影响。探讨冠心平治疗冠心病的相关机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组，用100μmol/LH2O2损伤细胞，以血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测细胞上清中TNF-α与IL-1水平。结果:100μmol/LH2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著降低TNF-α的水平；减少H2O2诱导ECV304 IL-1的产生。结论:冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其降低TNF-α和IL-1水平,从而调节血管内皮炎性反应有关。
关键词：血管内皮细胞;炎症因子
中图分类号：R541.4文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2631-03
Influence of Guanxinping on Levels of Inflammatory Factors of
, 百拇医药
Injured Vascular Enclothelial Cells Induced by H2O2
WAN Meng,ZHU Xuanxuan,LI Qiyi,ZHU Wuyuan,FU Rui,YAN Shihai
(Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, Jiangsu, China)
Abstract:Objective:The essay is meant to observe the effects of Guanxinping on the levels of TNF-α and IL-1 secreted by injured coronary vascular endothelial cell induced by H2O2 and to discuss possible mechanism of Guanxinping in treating coronary heart disease.Methods:Endothelial cells ECV304 were damaged with 100μmol/L H2O2, dividing cells into normal control group, model group, positive control group, low dose group, middle dose group and high dose group. Administration with serum pharmacological method was used to continue to observe the cells under a microscope,and detect levels of TNF-α and IL-1 then.Results:100μmol/L H2O2 could injure ECV304.Guanxinping significantly decreased levels of TNF-α and IL-1 secreted by injured coronary vascular endothelial cell.Conclusion:Guanxinping could reduce the damage of ECV304 induced by H2O2, the mechanism may be related to decreasing TNF-α and IL-1 levels, and regulating vascular endothelial inflammatory reaction.
, http://www.100md.com
Key words:VEC;inflammatory factors
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收稿日期：2011-07-31
基金项目：国家教育部博士点基金资助项目(20093237110001)；江苏省康缘中医药科技创新与奖励基金资助项目(HZ0803KY)
作者简介：万盟(1985-)，男，江苏南京人，硕士研究生，研究方向：药理学。
通讯作者：朱萱萱(1952-)，女，江苏南京人，教授、主任药师，博士研究生导师，研究方向：药理学研究。冠心病(CHD)是成年人死亡的重要原因，极大的威胁人类健康，并给社会及家庭带来了沉重的经济负担\[1\]。冠心平由黄精、当归、三七等五味药组成，源自古方化裁和经验积累。方中黄精补中益气，润心肺，补肝明目，补益精气，久服轻身延年不饥，是为君药。当归养血活血，补中有行，补而不滞，三七活血化瘀通脉，共为臣药。经多年临床研究证实本药对冠心病有良好的疗效，并对血管内皮细胞有保护作用\[2-3\]。内皮细胞是覆盖于全身血管和淋巴管内面的单层扁平细胞，具有多种生理功能，它作为组织与血液间的第一道屏障，是最先感受缺血缺氧损伤的细胞之一\[4\]。在缺血性心脏病的发生发展过程中，内皮细胞受损、功能障碍是其中的关键因素\[5\]。本文旨在研究冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤是否有保护作用及可能机制，来探讨冠心平治疗冠心病的机理。
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1 实验材料
1.1 实验用药
冠心平，由江苏省中医院制剂部提供，批号：20090610；维拉帕米，江苏恒瑞医药股分有限公司，批号：080227；生理盐水，小营制药厂，批号：20090523。
1.2 实验仪器
80-2离心沉淀器，上海手术器械厂；MODELDS-671电子秤，上海寺冈电子有限公司；AR1140电子天平，梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司制造；BP-Ⅱ型架盘药物天平，上海医用激光仪器厂；数显恒温水浴锅HH-2，国华电器有限公司；CO2培养箱(BB16)：Beraeus公司(德)；紫外分光光度计，上海光谱仪器有限公司；倒置显微镜(XDS-1B)重庆光学仪器厂；净化工作台(SW-CJ-1F)，上海手术器械厂；酶标分析仪：Sunrise-basic TECAN；漩涡混合器WH-851，上海环宇仪器厂；微孔滤膜，上海医药工业研究院；细胞培养板，丹麦NUNC公司。
, 百拇医药
1.3 实验动物
新西兰大耳白兔，雄性，由南京青龙山动物饲养场提供，合格证号：SCXK(苏)2007-0008。
1.4 人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)
由南京中医药大学药学院赠送。
1.5 实验试剂
DMEM：GIBCO公司，批号：1255136；碳酸氢钠：上海宏光化工厂，批号：050916；青霉素：山东鲁抗医药股份有限公司，批号：B080213；链霉素，大连美罗大药厂，批号：080707；胎牛血清：北京元享圣马生物研究所，批号：090321；胰蛋白酶：上海伯奥生物技术有限公司，批号：080401；PBS缓冲液：武汉博士德生物工程有限公司，批号：090521；四甲基偶氮唑盐(MTT)：Biosharp公司，批号：G793；二甲基亚砜：上海凌峰化学试剂有限公司，批号：080718；30%过氧化氢：分析纯，上海久忆化学试剂有限公司，批号：20080910；TNF-α测定试剂盒：美国R＆B公司，批号：201001；IL-1测定试剂盒：美国R＆B公司，批号：201001。, http://www.100md.com(万盟 朱萱萱 李七一 朱吾元 符蕊 严士海)
关键词：血管内皮细胞;炎症因子
中图分类号：R541.4文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2631-03
Influence of Guanxinping on Levels of Inflammatory Factors of
, 百拇医药
Injured Vascular Enclothelial Cells Induced by H2O2
WAN Meng,ZHU Xuanxuan,LI Qiyi,ZHU Wuyuan,FU Rui,YAN Shihai
(Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, Jiangsu, China)
Abstract:Objective:The essay is meant to observe the effects of Guanxinping on the levels of TNF-α and IL-1 secreted by injured coronary vascular endothelial cell induced by H2O2 and to discuss possible mechanism of Guanxinping in treating coronary heart disease.Methods:Endothelial cells ECV304 were damaged with 100μmol/L H2O2, dividing cells into normal control group, model group, positive control group, low dose group, middle dose group and high dose group. Administration with serum pharmacological method was used to continue to observe the cells under a microscope,and detect levels of TNF-α and IL-1 then.Results:100μmol/L H2O2 could injure ECV304.Guanxinping significantly decreased levels of TNF-α and IL-1 secreted by injured coronary vascular endothelial cell.Conclusion:Guanxinping could reduce the damage of ECV304 induced by H2O2, the mechanism may be related to decreasing TNF-α and IL-1 levels, and regulating vascular endothelial inflammatory reaction.
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Key words:VEC;inflammatory factors
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收稿日期：2011-07-31
基金项目：国家教育部博士点基金资助项目(20093237110001)；江苏省康缘中医药科技创新与奖励基金资助项目(HZ0803KY)
作者简介：万盟(1985-)，男，江苏南京人，硕士研究生，研究方向：药理学。
通讯作者：朱萱萱(1952-)，女，江苏南京人，教授、主任药师，博士研究生导师，研究方向：药理学研究。冠心病(CHD)是成年人死亡的重要原因，极大的威胁人类健康，并给社会及家庭带来了沉重的经济负担\[1\]。冠心平由黄精、当归、三七等五味药组成，源自古方化裁和经验积累。方中黄精补中益气，润心肺，补肝明目，补益精气，久服轻身延年不饥，是为君药。当归养血活血，补中有行，补而不滞，三七活血化瘀通脉，共为臣药。经多年临床研究证实本药对冠心病有良好的疗效，并对血管内皮细胞有保护作用\[2-3\]。内皮细胞是覆盖于全身血管和淋巴管内面的单层扁平细胞，具有多种生理功能，它作为组织与血液间的第一道屏障，是最先感受缺血缺氧损伤的细胞之一\[4\]。在缺血性心脏病的发生发展过程中，内皮细胞受损、功能障碍是其中的关键因素\[5\]。本文旨在研究冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤是否有保护作用及可能机制，来探讨冠心平治疗冠心病的机理。
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1 实验材料
1.1 实验用药
冠心平，由江苏省中医院制剂部提供，批号：20090610；维拉帕米，江苏恒瑞医药股分有限公司，批号：080227；生理盐水，小营制药厂，批号：20090523。
1.2 实验仪器
80-2离心沉淀器，上海手术器械厂；MODELDS-671电子秤，上海寺冈电子有限公司；AR1140电子天平，梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司制造；BP-Ⅱ型架盘药物天平，上海医用激光仪器厂；数显恒温水浴锅HH-2，国华电器有限公司；CO2培养箱(BB16)：Beraeus公司(德)；紫外分光光度计，上海光谱仪器有限公司；倒置显微镜(XDS-1B)重庆光学仪器厂；净化工作台(SW-CJ-1F)，上海手术器械厂；酶标分析仪：Sunrise-basic TECAN；漩涡混合器WH-851，上海环宇仪器厂；微孔滤膜，上海医药工业研究院；细胞培养板，丹麦NUNC公司。
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1.3 实验动物
新西兰大耳白兔，雄性，由南京青龙山动物饲养场提供，合格证号：SCXK(苏)2007-0008。
1.4 人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)
由南京中医药大学药学院赠送。
1.5 实验试剂
DMEM：GIBCO公司，批号：1255136；碳酸氢钠：上海宏光化工厂，批号：050916；青霉素：山东鲁抗医药股份有限公司，批号：B080213；链霉素，大连美罗大药厂，批号：080707；胎牛血清：北京元享圣马生物研究所，批号：090321；胰蛋白酶：上海伯奥生物技术有限公司，批号：080401；PBS缓冲液：武汉博士德生物工程有限公司，批号：090521；四甲基偶氮唑盐(MTT)：Biosharp公司，批号：G793；二甲基亚砜：上海凌峰化学试剂有限公司，批号：080718；30%过氧化氢：分析纯，上海久忆化学试剂有限公司，批号：20080910；TNF-α测定试剂盒：美国R＆B公司，批号：201001；IL-1测定试剂盒：美国R＆B公司，批号：201001。, http://www.100md.com(万盟 朱萱萱 李七一 朱吾元 符蕊 严士海)