1.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 收集不同浓度大黄素(5、10、20mg/L)作用24h的HL-60细胞和对照组HL-60细胞，用预冷的PBS洗涤2次，重悬于结合缓冲夜(binding buffer)中，加Annexin V-FITC和PI，室温避光孵育15min，流式细胞仪检测。

    1.2.4 DNA琼脂糖凝胶电泳分析 收集不同浓度大黄素(5、10、20mg/L)作用24h的HL-60细胞和对照组HL-60细胞，PBS洗涤，提取DNA，1.5%琼脂糖凝胶电泳，80V，2h，紫外灯下检测并摄像。

    1.2.5 Western blot检测Bcl-2蛋白 收集不同浓度大黄素作用 24h及对照组细胞 , PBS洗涤后，入裂解缓冲液 , 4℃孵育30min，12000r/min离心5min，取上清，测定蛋白含量。取20μg蛋白样品，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，电转移至硝酸纤维素膜上，1.2%BSA封闭后，加入一抗，室温1.5h，TBST洗膜3次，再加入二抗，室温孵育1h，TBST洗膜3次。ECL发光检测，X光片显影。

    1.2.6 统计学处理 采用SPSS 10.0统计学软件进行方差分析，数据以均数±s标准差表示。

    2 结 果

    2.1 大黄素对HL-60细胞增殖的影响

    大黄素作用24h后，HL-60细胞生长开始出现不同程度的抑制，20mg/L时抑制率为(19.8±2.7)%，与对照组相比有显著性差异(P<0.05) ......