十全大补汤对Lewis肺癌小鼠MMP-9基因表达的影响(2)
(2)逆转录反应：按照试剂盒说明进行。(3)PCR引物：MMP-9(Gene bank accession NO.BC046991)，上游引物：5’-CTG GTC ATA AGG GCT AAA T-3’，下游引物：3’-TCT TGG CGT CAC TTC TCA-3’，上下引物间距为199bp。内参基因为GAPDH (Gene bank accession NO.BC083149)，上游引物：5’-TAC TAG ACA AGA TGG TGA AG-5’，下游引物：5’-TGA CGG GAT CTC GTC CCT GGA AGA T-3’，上下引物间距为255bp。(引物由上海生工生物工程打桩服务有限公司合成)。
(4)PCR扩增：PCR反应体系总体积为25.8μL：去离子水18.0μL、10×buffer2.5 μL、Mgcl21.5μL、dNTP(10mM/each)0.5μL、Primer(up 50pM/μL)1.0 μL、Primer(down 50pM/μL)1.0 μL、Taq(5U/μL)0.3 μL、Template(即cDNA)1.0 μL。
(5)温度条件：GAPDH温度条件：95℃ 5min、94℃ 30s、508℃ 30s、72℃ 30s、72℃ 10min、4℃保存 ......
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