十全大补汤对Lewis肺癌小鼠MMP-9基因表达的影响(1)
摘 要：目的：探讨十全大补汤对Lewis肺癌组织中MMP-9基因表达的影响。方法：50只小鼠采用细胞株接种的方法复制Lewis肺癌转移模型，造模成功后，将小鼠分为模型组，CTX组，十全大补汤低、中、高剂量组。采用RT-PCR方法检测十全大补汤对 Lewis肺癌组织中MMP-9基因表达的影响。结果：十全大补汤中、高剂量组的肿瘤转移抑制率为43.20%、29.59%，两组中MMP-9的表达下降，与模型组比较有统计学意义(P<001)。结论：十全大补汤下调MMP-9基因表达是其抑制肺癌转移的分子机制之一。
关键词：肺癌；十全大补汤；基质金属蛋白酶-9
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2767-03
Effect of Shiquan Dabu Decoction on MMP-9 gene
Espression in Lewis Lung Cancer Mice
SUN Daxing1，ZHANG Yongjun2, BAO Wenlong2
(1.Zhejiang Tonglide Hospital, Hangzhou 310012,Zhejiang,China;
2.Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou 310022,Zhejiang,China)
Abstract:Objective: To study the effect of Shiquan Dabu Decoction on MMP-9 gene expression in Lewis lung cancer mice. Methods: The 50 mice were randomly divided into 5 groups: the model group, the Cyclophosphamide group, the low、middle and high dosage groups of Shiquan Dabu Decoction after the cancerometastasis mice model of Lewis lung cancer were established by inoculating tumor cell. The gene expression of MMP-9 in tumour tissues were detected by reverse-transcription polymerase chain reaction(RT-PCR). Results: The tumor metastasis inhibition rate in the middle and high dosage groups of Shiquan Dabu Decoction were 43.20% and 29.59% respectively. Moreover, the contents of MMP-9 genes,compared with model group, were decreased (P<0.01). Conclusion: Reducing gene expression of MMP-9 was one of molecular mechanism of Shiquan Dabu Decoction inhibiting lung cancer’s metastasis.
Key words:lung cancer; Shiquan Dabu Decoction; matrix metalloproteinases-9
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收稿日期：2011-07-22
作者简介：孙大兴(1958-)，男，浙江绍兴人，主任医师，硕士研究生导师，研究方向：中西医结合肿瘤临床。祖国医学认为，肺癌自始至终表现为一系列正气为癌毒所耗散的证候，癌毒的发生与发展均本于正虚，且随着病情进展，正气不断耗散，导致其外抗和内固癌毒的能力下解，进而发生癌毒的扩散。据此，我们选用经典的扶正固本方剂—十全大补汤进行抗肿瘤转移的研究，并对其作用机理作一初探，为临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及瘤株
C57BL/6小鼠50只，体重(20±2)g，鼠龄4周，雌雄各半。购于上海医学科学院实验动物中心。小鼠Lewis肺癌瘤株，购于上海医学科学院实验动物中心。瘤株于浙江中医药大学动物中心进行传代。
1.2 药物
十全大补汤：黄芪12g,肉桂3g,人参6g,茯苓9g,白术9g,甘草3g,熟地12g,白芍9g,川芎6g,当归9g(《方剂学》第6版上海科技出版社)。药材购自浙江中医药大学门诊部中药房，药品质量符合《中华人民共和国药典》标准(2005年版)。按常规方法煎成汤剂，配制成低、中、高剂量，其生药含量分别为0.4、0.8、1.6g/mL。4℃冰箱保存备用。注射用环磷酰胺(CTX)：0.2g/瓶，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为04041421，生理盐水配制成5mg/mL稀释液，4℃冰箱保存备用。
1.3 试剂及仪器
RT-PCR试剂盒、DNA Marke、琼脂糖购于上海捷兰生物科技有限公司。TGL-16B台式高速离心机，上海安亭科学仪器厂；2400型PCR仪，英国TECHNE公司产品；DY-501B型电泳仪，上海琪特分析仪器有限公司；H6-1微型电泳槽，上海琪特分析仪器有限公司；GIS-2008凝胶成像系统，上海天能科技有限公司。
1.4 方法
1.4.1 造模方法 取传代13天的Lewis肺癌瘤株，匀浆，制成单细胞悬液，无菌生理盐水调整细胞浓度至1×107个/ mL(台盼蓝染色实验示活细胞数大于95%)。每只02mL,接种于小鼠右腋皮下，复制小鼠Lewis肺癌转移模型。
1.4.2 动物分组 造模24h后，将小鼠随机分为5组(根据随机数字表进行分组)：模型组，CTX组，十全大补汤低、中、高剂量组，每组10只。
1.4.3 动物给药 分组当天起开始用药，具体给药方法如下：模型组小鼠灌服生理盐水，剂量为0.2mL/10g；CTX组小鼠腹腔注射CTX，剂量为每10g体重0.5mg药物(0.5mg /10g，下同)；十全大补汤低、中、高剂量组小鼠分别灌服低、中、高剂量十全大补汤，剂量分别为0.08、0.16、0.32g/10g。每日1次，连续15天。第16天，称体重，脱颈椎处死小鼠。取肺组织，计数肺内转移灶数目(取全肺，用Bouin氏液固定24h，然后用无水乙醇漂洗至黄色褪去，转移灶呈白色小点)。剥取肿瘤组织，液氮保存。
1.5 检测指标
1.5.1 小鼠整体状态的变化 观察小鼠的体重变化、饮食、行动、精神食欲、行动状态、毛色、皮毛的光泽度等全身情况。
1.5.2 抗转移率 公式为：(1-用药组平均肺转移结节数∕模型组平均肺转移结节数)×100%。
1.5.3 肺癌组织中MMP-9基因的表达 (1)总RNA抽提：采用异硫氰酸胍—酚—氯仿一步法提取。, http://www.100md.com(孙大兴 张永军 包文龙)
关键词：肺癌；十全大补汤；基质金属蛋白酶-9
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2767-03
Effect of Shiquan Dabu Decoction on MMP-9 gene
Espression in Lewis Lung Cancer Mice
SUN Daxing1，ZHANG Yongjun2, BAO Wenlong2
(1.Zhejiang Tonglide Hospital, Hangzhou 310012,Zhejiang,China;
2.Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou 310022,Zhejiang,China)
Abstract:Objective: To study the effect of Shiquan Dabu Decoction on MMP-9 gene expression in Lewis lung cancer mice. Methods: The 50 mice were randomly divided into 5 groups: the model group, the Cyclophosphamide group, the low、middle and high dosage groups of Shiquan Dabu Decoction after the cancerometastasis mice model of Lewis lung cancer were established by inoculating tumor cell. The gene expression of MMP-9 in tumour tissues were detected by reverse-transcription polymerase chain reaction(RT-PCR). Results: The tumor metastasis inhibition rate in the middle and high dosage groups of Shiquan Dabu Decoction were 43.20% and 29.59% respectively. Moreover, the contents of MMP-9 genes,compared with model group, were decreased (P<0.01). Conclusion: Reducing gene expression of MMP-9 was one of molecular mechanism of Shiquan Dabu Decoction inhibiting lung cancer’s metastasis.
Key words:lung cancer; Shiquan Dabu Decoction; matrix metalloproteinases-9
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收稿日期：2011-07-22
作者简介：孙大兴(1958-)，男，浙江绍兴人，主任医师，硕士研究生导师，研究方向：中西医结合肿瘤临床。祖国医学认为，肺癌自始至终表现为一系列正气为癌毒所耗散的证候，癌毒的发生与发展均本于正虚，且随着病情进展，正气不断耗散，导致其外抗和内固癌毒的能力下解，进而发生癌毒的扩散。据此，我们选用经典的扶正固本方剂—十全大补汤进行抗肿瘤转移的研究，并对其作用机理作一初探，为临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及瘤株
C57BL/6小鼠50只，体重(20±2)g，鼠龄4周，雌雄各半。购于上海医学科学院实验动物中心。小鼠Lewis肺癌瘤株，购于上海医学科学院实验动物中心。瘤株于浙江中医药大学动物中心进行传代。
1.2 药物
十全大补汤：黄芪12g,肉桂3g,人参6g,茯苓9g,白术9g,甘草3g,熟地12g,白芍9g,川芎6g,当归9g(《方剂学》第6版上海科技出版社)。药材购自浙江中医药大学门诊部中药房，药品质量符合《中华人民共和国药典》标准(2005年版)。按常规方法煎成汤剂，配制成低、中、高剂量，其生药含量分别为0.4、0.8、1.6g/mL。4℃冰箱保存备用。注射用环磷酰胺(CTX)：0.2g/瓶，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为04041421，生理盐水配制成5mg/mL稀释液，4℃冰箱保存备用。
1.3 试剂及仪器
RT-PCR试剂盒、DNA Marke、琼脂糖购于上海捷兰生物科技有限公司。TGL-16B台式高速离心机，上海安亭科学仪器厂；2400型PCR仪，英国TECHNE公司产品；DY-501B型电泳仪，上海琪特分析仪器有限公司；H6-1微型电泳槽，上海琪特分析仪器有限公司；GIS-2008凝胶成像系统，上海天能科技有限公司。
1.4 方法
1.4.1 造模方法 取传代13天的Lewis肺癌瘤株，匀浆，制成单细胞悬液，无菌生理盐水调整细胞浓度至1×107个/ mL(台盼蓝染色实验示活细胞数大于95%)。每只02mL,接种于小鼠右腋皮下，复制小鼠Lewis肺癌转移模型。
1.4.2 动物分组 造模24h后，将小鼠随机分为5组(根据随机数字表进行分组)：模型组，CTX组，十全大补汤低、中、高剂量组，每组10只。
1.4.3 动物给药 分组当天起开始用药，具体给药方法如下：模型组小鼠灌服生理盐水，剂量为0.2mL/10g；CTX组小鼠腹腔注射CTX，剂量为每10g体重0.5mg药物(0.5mg /10g，下同)；十全大补汤低、中、高剂量组小鼠分别灌服低、中、高剂量十全大补汤，剂量分别为0.08、0.16、0.32g/10g。每日1次，连续15天。第16天，称体重，脱颈椎处死小鼠。取肺组织，计数肺内转移灶数目(取全肺，用Bouin氏液固定24h，然后用无水乙醇漂洗至黄色褪去，转移灶呈白色小点)。剥取肿瘤组织，液氮保存。
1.5 检测指标
1.5.1 小鼠整体状态的变化 观察小鼠的体重变化、饮食、行动、精神食欲、行动状态、毛色、皮毛的光泽度等全身情况。
1.5.2 抗转移率 公式为：(1-用药组平均肺转移结节数∕模型组平均肺转移结节数)×100%。
1.5.3 肺癌组织中MMP-9基因的表达 (1)总RNA抽提：采用异硫氰酸胍—酚—氯仿一步法提取。, http://www.100md.com(孙大兴 张永军 包文龙)