模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究(2)
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2.2给药实验第16天，正常组每日上午以3mL/只灌服生理盐水，日1次；脾气虚、脾阳虚大鼠每日上午以3mL/只分别灌服四君子汤和理中汤水煎剂，日1次。为便于分析统计，将进行药物干预的动物组更名为脾气虚治疗组和脾阳虚治疗组。自由饮食，共14天。实验第30天，处理全部实验动物。
2.3模型宏观证候评定标准参考《中药新药临床研究指导原则》[2]和《中医实验动物模型方法学》[3]，并结合大白鼠的生物学特征，拟定：(1)脾气虚证评定标准：①体重增加缓慢或下降，同比消瘦；②倦怠，懒动，扎堆；③便形质软或溏；④肛温无明显变化；⑤食量减少；⑥弓背，背毛无光泽；⑦游泳耐力下降。(2)脾阳虚证评定标准：①体重增加缓慢或下降，同比消瘦；②倦怠，懒动，扎堆，神疲(眼睛无神，反应不灵敏)；③肛温下降；④粪便溏泻，肛门周围有污物；⑤食量减少；⑥弓背，背毛无光泽，沾有污物；⑦游泳耐力明显下降。(3)评分标准：①倦缩扎堆1分；②弓背，背毛无光泽1分；③食量减少1分；④体重减轻1分；⑤便形质软1分；⑥便形溏稀2分；⑦肛温下降2分；⑧游泳耐力下降1分；⑨游泳耐力明显下降2分；⑩久泄不止、脱肛2分。评分增加，提示症状加重。
2.4标本采集与指标检测实验动物根据实验设计分别于第15、30天分两次处理：动物于末次给药(或生理盐水)后，禁食不禁水12h，以10%水合氯醛0.3mL/100g腹腔麻醉，腹腔静脉取血，2mL血抗凝处理测血浆胃动素(MTL)，3mL不做抗凝处理，用于测定血清胃泌素(GAS)。GAS、MTL用放射免疫法测定。
2.5统计学方法数据用“均数±标准差(±s)”表示，实验结果输入计算机，用SPSS 13.0统计软件进行处理。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间均数两两比较采用q检验。
3结 果
3.1模型宏观证候评定脾气虚和脾阳虚造模大鼠均逐步出现便软、甚至稀溏，成群蜷缩，倦怠懒动，毛发枯槁，反应迟钝等情况。(1)体重增加量：造模前后各组大鼠体重均有不同程度的增长，正常组大鼠体重增加快，脾气虚组和脾阳虚组体重虽有增加，但缓慢，与同阶段的正常组比较，表现为消瘦，差异均有统计学意义(P<0.01)；脾气虚组和脾阳虚组之间比较，以脾阳虚组增值更小；但其差异无统计学意义(P>0.05)。(2)肛温：脾气虚组、脾阳虚组的肛温低于正常组，差异均有统计学意义(P<0.01)；且脾阳虚组更低于脾气虚组，两者差异亦有统计学意义(P<0.01)。(3)宏观证候计分：脾气虚组、脾阳虚组高于正常组，差异均有统计学意义(P<0.01)；且脾阳虚组更高于脾气虚组，两者差异亦有统计学意义(P<0.01)，评分增加，提示症状加重，故以脾阳虚组的症状更为严重(图1~3，表1)。
3.2模型大鼠GAS、MTL水平造模14天后，两组模型动物的血清GAS和血浆MTL水平紊乱。(1)血清GAS：脾气虚组和脾阳虚组低于正常组，差异均有统计学意义(P<0.01)；脾气虚组和脾阳虚组之间比较，虽然脾阳虚组更低，但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)血浆MTL：脾气虚组低于正常组，差异有统计学意义(P<0.01)；而脾阳虚组高于正常组，差异亦有统计学意义(P<0.01)；可见，脾气虚和脾阳虚对大鼠的血浆MTL影响不同(图4~5，表2)。 3.3补脾中药对脾虚宏观证候的影响经中药干预后，两个治疗组的各项脾虚症状和体征逐渐缓解或消失。(1)体重增加量：两个治疗组大鼠的体重增长加快，至实验第30天，其增长值与同阶段的正常组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。(2)肛温：治疗组大鼠的肛温逐渐恢复正常，至实验第30天，各组大鼠的肛温差异均无统计学意义(P>0.05)。此外，两个治疗组之间的体重增加量和肛温差异亦无统计学意义(P>0.05)。说明补脾中药对两组脾虚动物都有复建作用，从而亦反证了模型成功(表3)。
3.4补脾中药对GAS、MTL的影响经中药治疗后，两个治疗组大鼠的血液GAS、MTL紊乱得到改善。(1)血清GAS：两个治疗组大鼠的血清GAS水平均升高而接近于正常，差异无统计学意义(P>0.05)；(2)血浆MTL：脾气虚治疗组大鼠的血浆MTL水平升高，而脾阳虚治疗组大鼠的血浆MTL水平下降，与正常组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。此外，两个治疗组之间的血清GAS、血浆MTL水平在治疗后差异亦无统计学意义(P>0.05)。说明补脾中药对脾虚动物的胃肠激素紊乱有调节作用(表4)。
4讨 论
4.1脾虚模型的造模方法自1980年北京师范大学生物系报道脾虚证动物模型[4]以来，脾虚证动物模型研制工作取得了较大的成绩，其研究工作量居中医动物模型之首。郭氏[5]统计脾虚证的造模方法多达24种，如苦寒泻下法、偏食法、饮食失节法、耗气破气法、利血平法等，但是大部分造模方法在选用上存在着争议。
中医证候动物模型成功与否，与以下三方面息息相关：造模因素，动物体征，该证主要病理与症状、体征之间的关系。复杂的病因是中医临床症候的一大特点，本研究模拟中医病因，以大黄泻下法、游泳力竭法和饥饿法三因素复合建立脾气虚大鼠模型，同时，根据“脾阳虚多因脾气虚进一步发展，产生虚寒表现[6]”的临床症候特点，在脾气虚造模方法的基础上，对脾阳虚造模大鼠设定低温游泳环境，这是在中医理论的指导下从本质上对证候进行诱导，并充分体现了中医致病因素的多重性。造模后，大鼠相继出现消瘦、大便溏泄、倦怠、毛发不荣、蜷缩、扎堆、肛温下降等脾气虚、脾阳虚的症状与体征，符合本研究拟定的脾气虚证、脾阳虚证评定标准，其评分结果亦反映了两者在宏观证候上的递进关系。
4.2GASGAS是由主要分布于胃窦部和十二指肠近端1/3的G细胞所分泌，具有多种生理作用，如刺激胃酸及多种消化液的分泌，促进胃肠运动，营养胃肠粘膜等。刺激GAS分泌的最强因素是食物中经过消化的蛋白质分解产物[7]。本实验复制的脾气虚、脾阳虚大鼠模型，其血清GAS水平低于正常，差异均有统计学意义(P<0.01)；将脾气虚和脾阳虚之间进行比较，虽然以脾阳虚更低，但两者间的差异并无统计学意义(P>0.05)；经相应健脾中药治疗后，原模型大鼠的血清GAS含量上调。说明血清GAS降低可作为脾气虚证和脾阳虚证的微观辨证指标，但尚不能用以鉴别该二证。
脾气虚证又称为脾不健运证[6]，而脾阳虚证即是在脾不健运的基础上出现虚寒之象。故脾气虚、脾阳虚大鼠的血清GAS水平降低，可能是由于脾虚运化失职，食欲减退，胃内容物减少，经过消化的蛋白质分解产物也减少，使GAS的分泌量降低，血清GAS水平下降。但又因为两证在“主运化”方面的功能异常在程度上并无明显差异，所以反映在血清GAS水平上两者之间亦区别不大。
4.3MTLMTL主要由十二指肠和近端空肠黏膜隐窝内的Mo细胞及肠神经丛中的肽能神经元分泌，通过作用于平滑肌细胞的特异性受体引起平滑肌收缩，促进胃肠运动，提高胃肠道、胆道、oddis括约肌的收缩力和张力。引起MTL释放的主要因素有胃腔内刺激物、胃扩张、迷走神经兴奋、蛙皮素等。国外有研究表明，功能性消化不良患者或实验动物血浆MTL水平降低 ......
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