中药熏蒸在治疗大鼠佐剂性关节炎中TH1/TH2的变化(2)
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参见附件。
1.3大鼠血清TNF-α、IL-4、IL-10、IFN-γ测定按试剂说明书操作。将所得数据采用Curve Expert 1.40(Daniel Hyams公司产品)描绘标准曲线，并计算出吸光值。
1.4统计学处理全部数据采用SPSS 11.5 for Windows统计软件包进行统计分析。正态分布数据用均数±标准差(±s)表示，多组数据的显著性比较用单因素方差分析；两样本的显著性比较用t检验；等级资料采用非参数分析，P<0.05认为差异有统计学意义，P<0.01为有显著统计学意义，P>0.05则无统计学意义。全部统计分析均为双侧检验。
2 结 果
2.1 对致炎细胞因子TNF-α、IFN-γ的影响从对TNF-α的影响来看，模型组、水熏组、低熏组与正常组比较，TNF-α水平明显升高，有显著差异(P<0.01)；各治疗组与模型组比较，TNF-α水平明显降低，有显著差异(P<0.01)；高熏组、西药组与水熏组比较，TNF-α水平明显降低，有显著差异(P<0.01)；高熏组与低熏组比较，TNF-α水平明显降低，有显著差异(P<0.01)。从对IFN-γ的影响来看，模型组、水熏组与正常组相比较，IFN-γ水平显著升高，有显著差异(P<0.01)；各治疗组与模型组比较，IFN-γ水平显著降低，有显著差异(P<0.01)；高熏组、西药组与水熏组比较，IFN-γ水平明显降低，有显著差异(P<0.01)；低熏组与水熏组比较，IFN-γ水平降低，有统计学意义(P<0.05)(见表1)。
以上研究结果提示：中药熏蒸及外用扶他林喷雾剂可降低致炎细胞因子IFN-γ、TNF-α的水平，高浓度中药熏蒸优于低浓度中药熏蒸，蒸馏水熏蒸也有效。
2.2对抗炎细胞因子IL-4、IL-10的影响从对IL-4的影响来看，高熏组与正常组比较，IL-4水平明显升高，有显著差异(P<0.01)；西药组与正常组比较，IL-4水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；高熏组、西药组与模型组、水熏组、低熏组比较，IL-4水平明显升高，有显著差异(P<0.01)。从对IL-10的影响来看，模型组与正常组比较，IL-10水平明显降低，有显著差异(P<0.01)；高熏组与正常组比较，IL-10水平明显升高，有显著差异(P<0.01)；低熏组、高熏组、西药组与模型组比较，IL-10水平明显升高，有显著差异(P<0.01)；高熏组与水熏组比较，IL-10水平明显升高，有显著差异(P<0.01)；西药组与水熏组比较，IL-10水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；高熏组与低熏组比较，IL-10水平显著升高，有显著差异(P<0.01)(见表2)。
以上研究结果提示：中药熏蒸及外用扶他林喷雾剂可提高抗炎细胞因子IL-4、IL-10的水平，高浓度中药熏蒸优于低浓度中药熏蒸及蒸馏水熏蒸。
2.3 对TNF-α+IFN-γ/IL-4+IL-10的影响从表3可以看出，模型组、水熏组与正常组比较，TNF-α+IFN-γ/IL-4+IL-10比值明显升高，有显著差异(P<0.01)；各治疗组与模型组比较，TNF-α+IFN-γ/IL-4+IL-10比值明显降低，有显著差异(P<0.01)；高熏组、西药组与水熏组比较，TNF-α+IFN-γ/IL-4+IL-10比值明显降低，有显著差异(P<0.01)。提示中药熏蒸及外用扶他林喷雾剂可降低TNF-α+IFN-γ/IL-4+IL-10比值，蒸馏水熏蒸也有效。
3讨 论
Th细胞是能辅助T、B淋巴细胞应答的功能亚群。Th细胞前体在抗原刺激下，分化为中间阶段的Th0，Th0可同时产生Th1和Th2型细胞因子。Th1主要分泌促炎性细胞因子，如IL-2、IFN-γ和TNF-α。Th2细胞与Th1细胞相反，主要分泌抗炎细胞因子，如IL-4、IL-5、IL-10等。研究表明，Th1和Th2细胞因子之间是相互抑制的，如Th1的细胞因子IFN-γ可抑制Th2的反应，刺激Th1细胞因子基因表达，而Th2细胞因子IL-4则作用相反[3]。
TNF-α及IFN-γ类风湿性关节炎中明显升高，是主要致炎因子。而IL-4、IL-10则可抑制致炎细胞因子IFN-γ的生成，下调IL-1、TNF-α等炎性细胞因子水平, 减低单核-巨噬细胞和软骨细胞产生的基质金属蛋白酶对RA单核细胞的刺激，从而阻止了RA单核细胞对软骨蛋白多糖的合成的抑制，IL-4还能下调细胞免疫反应，对关节滑膜和软骨起保护作用[4-5]。本研究正常组与模型组对比显示，AA大鼠血清IFN-γ和TNF-α水平明显升高，而IL-4、IL-10水平降低，提示AA大鼠存在Th1/ Th2水平失衡，且以Th1型细胞为主。因此，调节体内Th1/Th2变化，对控制炎症反应具有积极作用。经中药熏蒸后，促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ降低，抗炎细胞因子IL-4、IL-10水平升高，使AA大鼠体内失衡的Th1/ Th2得以恢复，提示中药熏蒸的抗炎机理与调节Th1/ Th2有关。童利民[6]等用武当追风胜湿液熏蒸治疗类风湿性关节炎患者，也认为该疗法对T细胞亚群有非常显著的调节作用，提示临床实验与动物试验相一致。
本研究原本打算采用流式细胞技术检测大鼠血清Th1/Th2比值，但因目前市场尚无该种试剂盒，因此我们选取了由Th1和Th2分泌的细胞因子各2个来间接反应Th1/Th2比值。由于免疫反应是个复杂的网络，受本研究时间、经费等问题限制，仅仅选取了几个主要的细胞因子，难免失准，选择更多细胞因子的测定可能会对结果的客观性、真实性有益。
参考文献
[1] Elenkov I, Calcagni E.Stress system activity, innate and T helper cytokines, and susceptibility to immune-related diseases [J].Ann N Y Acad Sci,2006,1069:62-76.
[2] CM Verhoef,JAG van Roon,JLAM van Roy,et al ......
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