恶露不尽气虚证型动物模型建立及评价标准和作用机制的研究(2)
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参见附件。
1.5.2显微病理观察和测定药品非临床研究组织病理图像数据自动定量分析管理系统对舌象图像进行分析，对舌、子宫、卵巢病理切片图像测定舌乳头密度、菌状乳头密度、舌苔厚度，子宫内膜上皮细胞高度和黏膜层高度的变化，卵巢各级卵泡分布、数量以及形态。
1.5.3恶露情况观察和测定观察记录恶露色泽和浸出量情况，以及恶露总出血天数，恶露色泽分淡红、红、紫、黑、血瘀5种情况观察，收集子宫内置棉球测定恶露血量，方法用血红蛋白吸管大鼠尾静脉采血0.02mL,加入50g/L NaOH溶液4mL中,混匀待用。将收集的每鼠每天恶露血棉球分别置于试管内，根据出血量的情况加适量50g/L NaOH浸泡挤压搓洗棉球血渍，浸洗后的溶液倒入另一试管内保存，再加适量50g/L NaOH浸泡棉球,挤压搓洗血渍,倒入保存容器。根据棉球血渍洗脱情况,决定是否再浸洗1~2次。将先后所有浸提液混匀,记录所用50g/L NaOH总量,取5mL浸提液过滤,分别将(1)已过滤的浸提液4mL，(2)大鼠尾静脉血50g/L NaOH溶液4mL，(3)以50g/L NaOH为空白对照,在546nm波长记录吸光度(A)值。计算公式：恶露血量(mL)=
尾静脉血量(0.02 mL)×子宫内浸提液A值×V2尾静脉血A值×V1
V1=稀释尾静脉血所用50 g/L NaOH量(4mL),V2=浸提子宫血所用50 g/L NaOH量(mL)。
1.5.4生殖激素的测定将冷冻血浆取出用ELISA酶联免疫法统一进行大鼠绒毛膜促性腺激素(CG)，雌三醇(E3)，胎盘催乳素(HPL)的定量测定。
2结果
2.1舌象情况
按照中医肉眼观察下的大鼠舌色、舌苔、舌质状况，结果未麻醉大鼠因头舌晃动厉害几乎无法观察其舌象，只可麻醉后进行观察，d14麻醉后肉眼其各组大鼠舌色均见以淡红色、舌苔以少苔为主，区分明细不太明显。见插页Ⅱ图1～2。
运用专用显微数码摄像仪成功观察和采集到各组麻醉后大鼠舌象图像，但因实验周期长导致背景色度差异不能定标原因未做色度定量分析。d14麻醉后显微观察可见正常对照组舌呈现粉红色，苔质铺被均匀，苔质红蕴；恶露模型组舌色淡或粉红，舌苔稍厚，舌质显干涩；气虚模型组舌呈现舌色淡，舌苔薄稀，舌质湿滑；气虚治疗组的舌呈现粉红色，苔质舌苔均厚，苔质红蕴。见插页Ⅱ图3～6。
大鼠舌组织病理切片图像用组织病理图像数据自动定量分析管理系统测定舌乳头密度、菌状乳头密度、舌苔厚度，各组与气虚模型组比较，结果恶露模型组和气虚治疗组的顶端舌苔厚度以及气虚治疗组的底端舌苔厚度增加有显著性差异，P<0.05或0.01，恶露模型组的乳头密度增加有显著性差异，P<0.05。见表1。
表1恶露不尽气虚证型动物模型大鼠舌组织病理的测定
组别n乳头密度
(个/400倍视野)菌状乳头密度
(个/400倍视野)顶端舌苔厚度
(mm/400倍视野)底端舌苔厚度
(mm/400倍视野)正常对照组97.67±2.351.11±1.54145.92±29.24243.65±29.23气虚组模型107.33±1.320.33±0.71109.92±26.74246.02±47.70气虚治疗组106.50±1.180.30±0.67 171.82±36.22** 295.92±44.34*恶露模型组10 7.90±1.73*0.80±1.14 152.46±24.53**289.01±64.47注：与气虚模型组比较，*P<0.05,**P<0.01。
2.2子宫、卵巢病理结果
大鼠子宫、卵巢组织病理切片图像用组织病理图像数据自动定量分析管理系统测定子宫内膜上皮细胞高度和黏膜层高度的变化，卵巢各级卵泡分布、数量以及形态。各组与气虚模型组比较，结果子宫气虚治疗组和正常对照组的上皮细胞高度减少以及正常对照组的黏膜层高度增加有显著性差异，P<0.05或0.01，卵巢气虚治疗组的颗粒层厚度减少有显著性差异，P<0.01。见表2～3。
表2恶露不尽气虚证型动物模型大鼠子宫病理的测定
组别n上皮细胞高度
(mm/400倍视野)黏膜层高度
(mm/100倍视野)正常对照组975.63±5.89** 965.33±241.87*气虚模型组10124.91±30.77568.48±119.83气虚治疗组1091.23±8.49**597.92±307.33恶露模型组10140.52±26.31655.98±86.29注：与气虚模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
2.3恶露情况
观察到的大鼠恶露色泽一般为鲜红、淡红、黯红几种情况，正常对照组无恶露，但因有阴道内分泌液被收集呈现淡黄色或无色等情况，气虚模型组恶露呈现淡红或鲜红至淡红或黯红至鲜红至淡红或黯红至淡红至鲜红等变化情况，恶露模型组恶露呈现鲜红至黯红或黯红至鲜红或鲜红至淡红或黯红至鲜红至淡红等变化情况，气虚治疗组恶露呈现淡红或鲜红至淡红等变化情况。各组与气虚模型组比较，结果气虚治疗组的恶露血量减少有显著性差异，P<0.01；正常对照组的恶露血量和恶露出血天数减少有显著性差异，P<0.01；恶露模型组恶露血量增加有显著性差异，P<0.05。见表4。
表4恶露不尽气虚证型动物模型大鼠恶露血量的测定
组别n恶露血量(mL)恶露出血天数(天)正常对照组90.0036±0.0017** 0.0±0.0**气虚模型组100.4500±0.21004.1±0.7气虚治疗组10 0.1100±0.0740**4.6±1.2恶露模型组100.6700±0.3300*4.1±1.4注：与气虚模型组比较，*P<0.05,**P<0.01。
2.4生殖激素测定结果
ELISA酶联免疫法对恶露不尽气虚证型大鼠绒毛膜促性腺激素(CG)，雌三醇(E3)，胎盘催乳素(RPL)进行测定，各组与气虚模型组比较，气虚治疗组的CG、 E3、 RPL减少有显著性差异，P<0.01；正常对照组的RPL减少有显著性差异，P<0.05。见表5。
表5恶露不尽气虚证型动物模型大鼠生殖激素的测定
组别nRPL (ng/mL)CG(ng/mL)E3(pg/mL)正常对照组96.65±1.61*4.47±1.837.17±4.28气虚模型组1010.21±3 ......
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