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编号:12209104
黄芪建中汤对脾气虚证肺癌转移小鼠TIMP1基因转录的影响(2)
http://www.100md.com 2012年4月1日 包素珍 郑小伟 宋红 曹月娇 孙在典
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    参见附件。

     2.2检测指标

    2.2.1 血清木糖浓度、血清胃泌素含量 小鼠眼球后取血,按试剂盒说明测定血清木糖、血清胃泌素浓度。

    2.2.2 抗转移率

    取肺组织,Bouin氏液固定,24h内肉眼及镜下计数小鼠肺表面转移结节数。并计算抗转移率。

    抗转移率=(1-用药组平均肺转移结节数∕模型组平均肺转移结节数)×100%

    2.2.3 TIMP1基因检测 RT-PCR方法检测小鼠肿瘤组织中TIMP1 基因的转录(以为β-actin内参)。上游引物:3'- AGT GAA ACG AAC GGA CGG -5'、下游引物:5'- CCC AGA ACC GCA GTG AAG -3',产物长度(bp):274bp将两种扩增产物分别注入4% 的琼脂糖凝胶上电泳,GIS-2008凝胶成像系统分析电泳产物。

    2.3 统计学方法

    采用统计软件包SPSS 13.0版统计,计量资料数值用均数±标准差(±s)表示。

    3 结 果

    3.1 脾气虚模型成功建立

    血清木糖浓度及胃泌素含量见表1。模型组与正常组比较,差异有非常显著意义(P<0.01)

    3.2 黄芪建中汤对脾气虚证Lewis肺癌小鼠肺内转移灶的影响

    本实验结果表明:肿瘤对照组及模型对照组小鼠肺组织表面转移灶结节数量较多,结节较大,部分结节相互融合,结节中央可见坏死,环磷酰胺组和中药各剂量组小鼠转移结节数量较少,结节较小,且较为孤立,结节中央未见坏死。与肿瘤对照组比较,模型对照组转移灶增多,差异有统计学意义(P<0.01),环磷酰胺组有明显的抑制作用(P<0.01),中药高剂量组有抑制作用(P<0.01);与模型对照组比较,各治疗组均有明显的抑制作用,差异有显著统计学意义(P<0.01);与环磷酰胺组比较,高剂量组无差异(P>0.05)。环磷酰胺组及中药低、中、高剂量组的转移抑制率分别为53.9%、23.1%、29.8%、39.2%。见表2。

    3.3 黄芪建中汤对小鼠肺癌转移TIMP1-mRNA基因转录的影响

    实验结果显示,肿瘤对照组及模型对照组小鼠肿瘤组织中TIMP1-mRNA的表达较低,中药各组TIMP/β-actin比值均高于肿瘤对照组,低剂量组差异有统计学意义(P<0.05),中、高剂量组差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组比较,环磷酰胺组和黄芪建中汤各剂量组均有显著统计学差异(P<0.01);与环磷酰胺组比较,中药高剂量组无差异(P>0.05)。见表3。

    表3不同组别小鼠肿瘤组织中TIMP1-mRNA基因转录(±s)

    4讨 论

    恶性肿瘤浸润是转移的前提。而肿瘤的浸润是一个极其复杂的过程,其中降解过程是关键,即癌细胞从原发灶脱落后,必须突破细胞外基质(ECM)和血管壁基底膜组成的结构屏障,才能进入宿主微循环。基质金属蛋白酶(MMP)是降解正常细胞和肿瘤细胞的结构支持网络的蛋白水解酶,它降解ECM,以促进肿瘤浸润、转移,基质金属蛋白酶组织抑制剂 (TIMP)是MMP的天然抑制剂,通过下调MMP活性,对维护ECM的稳定和完整具有重要作用[2]。在此环节中 MMPs和TIMPs起到重要作用。

    TIMPs是组织中一些调节MMP活性的抑制分子,抑制MMPs的活性。TIMP可与活化的或无活性MMP结合,终止MMP活动,有效的抑制MMP的活性,达到抑制癌细胞转移及侵袭[3]。

    脾气虚状态下机体的免疫功能明显下降,研究发现肿瘤发生转移与红细胞的免疫功能存在明显的相关性,这与红细胞免疫黏附能力低下,循环免疫复合物增高,导致肿瘤细胞黏附能力增强,ECM降解加快,运动相关蛋白活性增加,肿瘤逃避宿主免疫反应等有关[4]。在这种状态下,提高机体免疫力起重要作用。黄芪建中汤是益气健脾的代表方之一,出自《金匮要略》,具有温中补虚,和里缓急之功。黄芪建中汤可通过其益气健脾作用来改善机体的免疫功能,从而抑制肿瘤的发生及发展。王红伟等发现[5]黄芪建中汤可使脾虚大鼠模型,红细胞计数、血红蛋白(HB)、淋巴细胞转化率等趋于正常,表明黄芪建中汤有增强机体免疫力的作用。文献[6]报道黄芪建中汤可提高虚寒胃痛患者淋巴细胞转化率及血清含量,有提高细胞免疫功能的作用。现代研究发现[7]黄芪建中汤可降低因长期炎症刺激引起的胃黏膜原癌基因C-erb-1的活化而过度表达的表皮生长因子受体-mRNA水平,减少其与表皮生长因子结合的机会,解除细胞损伤作用,从而抑制胃癌的发生。本实验黄芪建中汤低、中、高剂量组抗转移率分别为25.4%、32.0%、41.8%。提示:黄芪建中汤可显著改善小鼠的脾气虚状态,从而抑制肿瘤的转移。另外从TIMP1-mRNA基因转录的表达得出黄芪建中汤可上调TIMP1-mRNA的表达,从而抑制肿瘤转移。

    脾气虚抑制TIMP1的转录水平,可能是由于脾气虚抑制肿瘤细胞调亡,对肿瘤肿瘤负性调节作用降低,从而抑制TIMP1的转录,也可能是由于脾气虚影响了TIMP1在调控金属蛋白酶(MMP)的活性方面的作用,其作用机理尚待遇进一步研究。黄芪建中汤上调TIMP1的转录水平,抑制肿瘤转移,这可能是由于黄芪建中汤改善脾气虚状态来上调TIMP1的转录水平,进而抑制肿瘤转移,其作用机制及抑癌途径有待于进一步深入探讨。

    参考文献

    [1] 马中州,黄壮士,付东宏.小细胞肺癌中MMP-10和TIMP-3的表达[J].中国医药指南,2009(18):41-42.

    [2] 杨大运 ......

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