维药桑叶中总黄酮的提取与分离(2)
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参见附件。
表1 各种提取方法总黄酮的得率
方法石油醚及乙醇提取乙醇回流提取超声波提取
总黄酮含量(%)1.301.111.50
2.3分离与鉴定
称取已处理好的桑叶 4.26 Kg，用 80 %的乙醇浸泡 5 h，在超声波清洗器中提取2次，每次 2 h，过滤，减压回收乙醇，得到浸膏物，加适量水，搅拌，放置过夜。依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取母液并回收溶剂。取乙酸乙酯部分，与适量硅胶搅拌，上硅胶柱，用不同比例的氯仿-甲醇对混合溶剂进行洗脱分离，以薄层色谱确定相同成分。各部分反复上硅胶柱进行纯化，得到了化合物1和化合物2。这两种化合物的结构通过IR、1H-NMR 、13C-NMR及MS分析进行了结构鉴定。
化合物 1 ： 淡黄色晶体，m.p. 176~ 178 ℃。IR (KBr) (υ/cm-1): 3400 (OH), 1658 (C =O), 1608, 1506, 1466。1H-NMR (CD3OH-d6, 400 MHz)δ: 12.61 (1H, s, OH),8.09 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-2, 6), 6.92 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-3, 5), 6.45 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.25 (1H, d, J = 2.9 Hz, H-6), 5.30 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1"); 13C-NMR (DMSO-d6, 400 MHz)δ: 61.0 (C-6"), 70.0 (C-4"), 74.4 (C-2"), 76.6 (C-3"), 77.6 (C-5"), 93.8 (C-8), 98.8 (C-6), 101.0 (C-1"), 104.2 (C-10), 115.2 (C-3, 5), 121.1 (C-1), 131.0 (C-2, 6), 133.4 (C-3), 156.4 (C-2), 156.5 (C-9), 160.1 (C4), 161.4 (C-5), 164.3 (C-7), 177.6 (C-4)。ESI-MS,m/z(%): 449 ([M + H]+)，471 ([M + Na]+)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定为山柰酚-3-O-葡萄糖苷。
化合物 2 : 黄色粉末，m.p. 236~ 238 ℃。IR (KBr)(υ/cm-1): 3265 (OH), 1652 (C =O), 1596, 1560, 1472。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz,): 12.64 (brs, 1H, OH-5), 10.87 (brs, 1H, OH-7), 9.71 (brs, 1H, OH-3'), 9.22 (brs, 1H, OH-4'), 7.60 (m, 2H, H-2', 6')，6.89 (1H，d，J = 8.81 Hz, H-5), 6.41 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 5.64 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1"), 5.29, 5.07, 4.95, 4.26 (brs, 4H, glucose-OH), 3.08~ 3.60 (m, 6H, H-2", H-3", H-4", H-5", H-6"); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz,): 61.1 (C-6"), 70.1 (C-4"), 74.2 (C-2), 76.7 (C-3"), 77.7 (C-5"), 93.6 (C-8)，98.8 (C-6)，101.1 (C-1"), 104.1 (C-10), 115.3 (C-2), 116.4 (C-5), 121.3 (C-1), 121.7 (C-6)，133.5 (C-3), 141.9 (C-3), 148.6 (C-4), 156.3 (C-2), 156.5 (C-9), 161.4 (C-5), 164.2 (C-7), 177.6 (C-4)。ESI-MS,m/z(%): 465([M + H]+), 487([M + Na]+)。以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定为槲皮素-3-O-葡萄糖苷。
3 结 果
根据表 1可知，超声波提取中测定的总黄酮含量为 1.50%，多于石油醚及乙醇提取法和乙醇回流提取法。
经实验研究分析, 桑叶中黄酮类的最佳提取工艺为 80 %的乙醇浸泡 5 h，在超声波清洗器中超声提取 2次，每次 2 h。提取液回收乙醇后,梯次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取母液并回收溶剂，乙酸乙酯部分经硅胶柱层析，薄层层析进行分离。
乙醇可以较广泛地溶解各种黄酮，同时， 80%的乙醇黏度较小，有利于减少传质过程中溶剂的阻力，加快桑叶黄酮在溶剂中的扩散，从而提高提取效率。用超声波提取法时物料吸收微波能后通过偶极子旋转和离子传导两种方式快速加热，加剧了体系中分子的碰撞频率，使细胞部分破裂，使黄酮分子容易从药材内部扩散到萃取溶剂中，从而明显提高浸出率。微波提取提高黄铜有效成分的传质速度，缩短加热时间，提高提取效率，节约能源，适合极性分子的提取。
参考文献
[1] LEI Wang, TING Gong, ROU Yun Chen. Two new prenylflavonoids from Morus nigra L ......
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