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编号:12209257
洋金花提取物对肠缺血再灌注大鼠的作用研究(2)
http://www.100md.com 2012年4月1日 林斌,张扬,吴人杰,章建民
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    参见附件。

     2.2.2 受试药制备及剂量设置

    阳性对照药物的制备:取硫酸阿托品注射液0.5mL,至10mL容量瓶中,加生理盐水至刻度,摇匀,即得阿托品阳性药溶液。

    洋金花提取物的制备方法:采用酸水提取,提取液碱化后以乙酸乙酯反复萃取,乙酸乙酯萃取液合并,挥干溶剂后以生理盐水溶解。洋金花提取物浓度30mg/mL,相当于生药含量为0.3g/mL。

    2.2.3 洋金花提取物成分分析

    采用液相色谱分析:SHIMADZU HPLC仪,C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:0.05mol/l磷酸二氢钾溶液(内含0.0025mol/L庚烷磺酸钠)-乙腈(84∶16)(调节pH至5.0)等度洗脱,流速1.000mL·min-1,柱温:35℃,检测波长:215nm。以氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品为对照品,进行分析,色谱图见图1。表明洋金花提取物中主要含有这两种生物碱成分。

    2.2.4 模型评价

    小肠组织损伤评分:取部分肠管以10%甲醛固定,制备小肠全层组织石蜡切片,行苏木精-伊红(HE)染色。在400倍显微镜下任取5个非重叠视野观察小肠组织损伤程度并评分,取其平均值用于统计。用Chiu氏6级评分法评价损伤程度:0分为正常肠黏膜绒毛结构;1分为肠黏膜绒毛顶端上皮下间隙增宽;2分为绒毛上皮下间隙进一步扩大,绒毛尖端上皮抬高与固有层剥离;3分为绒毛两侧上皮成块状脱落;4分为上皮完全脱落,仅存固有层结构;5分为黏膜固有层崩解、出血和溃疡。

    2.2.5 指标测定 小肠黏膜中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)检测:小肠标本在冷生理盐水内漂洗、滤纸吸干黏液,沿肠管长轴切开,玻片刮取黏膜并称重。组织匀浆、离心后取上清进行TNF-α和IL-6水平酶联免疫测定,按试剂盒说明书操作。

    2.2.6 统计学处理 应用SPSS 12.0统计软件分析,采用单因素方差分析和q检验进行组间比较。

    2.3 结果

    2.3.1 小肠黏膜的病理改变与假手术组比较,模型对照组可见上皮细胞脱落,绒毛尖端上皮抬高与固有层剥离,可见散在的溃疡和出血灶,并有大量的中性粒细胞浸润;应用洋金花提取物后,治疗组肠黏膜损伤明显减轻,高剂量组尤为明显;与阳性对照组作用相仿,见插页Ⅲ图2。

    2.3.2 小肠损伤评分 假手术组(0.31 ±0.08),模型组(4.06 ±0.28)明显高于假手术组;给药高剂量组(1.29±0.22),给药低剂量组(3.09±0.25),以及阳性对照组(3.00±0.21),均显著低于模型组。

    2.3.3 洋金花提取物对大鼠小肠黏膜中的TNF-α及IIL-6水平的影响 结果见表1。

    由表1可知,与假手术组相比,模型组小肠黏膜中TNF-α、IIL-6水平显著升高,经阳性治疗药干预后二者水平显著下降,两组洋金花给药组大鼠小肠黏膜中TNF-α、IIL-6水平均显著下降,其作用与阳性对照组无显著差异。

    3讨 论

    肠黏膜作为肠道乃至整个机体代谢最活跃的部位,因其血管发夹状结构及逆流交换机制,使其成为创伤、休克及严重感染时最易受缺血/再灌注等病理因素影响,且复苏时恢复最迟,导致肠黏膜屏障功能受损,进而激发全身炎症反应综合征(SIRS)[6]。本实验结果提示,模型组大鼠的小肠在缺血/再灌注后,其黏膜和肌肉层均有白细胞聚集和炎性反应,同时肠黏膜的屏障功能受到破坏,如肠黏膜上皮细胞的坏死、脱落、出血及溃疡等,而且相关的促炎细胞因子注激发了炎症反应过程。

    本实验首次观察了洋金花中生物碱类成分对大鼠肠缺血/再灌注损伤的保护作用,在再灌注前静脉注射洋金花提取物10 mg·kg- 1可使小肠损伤评分明显降低,且TNF-α和IL-6含量减少,说明洋金花中的生物碱能够有效地减少炎性细胞因子的产生,减轻肠组织炎症反应造成的病理损害。

    参考文献

    [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:1部[S].北京:化学工业出版社,2000:219.

    [2]孙曼春.洋金花的药理作用与临床应用[J].医药导报,2003 ......

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