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编号:12209223
人参皂苷Rg1对SHR大鼠纹状体GDNFmRNA基因表达和多巴胺含量的影响(2)
http://www.100md.com 2012年4月1日 胡颖,林忠东,郑飞霞,施旭来
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    参见附件。

     1.6 图像分析及处理每只大鼠选纹状体组织切片1张,每张切片高倍镜下4个不同视野摄片采集图像,采用美国Media Cybernetics公司生产的 Image-Pro Plus图像分析软件(Version 6.0)测定阳性颗粒的平均吸光度值作为GDNFmRNA的相对含量。

    1.7 统计学方法 数据以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS 12.0软件进行组间t检验,P<0.05为差异有显著性。

    2结 果

    2.1 大鼠纹状体DA含量的变化盐酸哌甲酯控释片组和人参皂苷Rg1组与模型对照组比较,纹状体多巴胺的含量显著升高,人参皂苷Rg1组与盐酸哌甲酯控释片组相比,纹状体多巴胺的含量显著升高,见表1。

    2.2大鼠纹状体GDNFmRNA基因表达的变化盐酸哌甲酯控释片组和人参皂苷Rg1组的纹状体神经元的细胞膜及细胞浆GDNFmRNA基因表达明显增强,模型对照组未见明显表达,见插页Ⅳ图1~3。盐酸哌甲酯控释片组和人参皂苷Rg1组与模型对照组比较,阳性颗粒的平均吸光度值显著升高,人参皂苷Rg1组与盐酸哌甲酯控释片组相比,阳性颗粒的平均吸光度值显著升高,见表2。

    3讨 论

    ADHD的发病机制非常复杂,神经生化方面的研究发现患者活体脑内纹状体中多巴胺转运体(DAT)水平明显高于正常对照组,提示ADHD患者存在DA清除过度,致使突触间隙DA的有效浓度不足,故提出 DA功能异常可能是 ADHD的发病基础[3]。目前,哌甲酯是治疗ADHD的首选药物,其主要作用机制是阻断单胺类神经递质如去甲肾上腺素和多巴胺再摄取进入突触前神经元,并促进单胺类递质释放,本实验也发现哌甲酯能提高SHR大鼠纹状体中DA的含量。

    1993年,Lin等[4]从大鼠胶质细胞来源的B49细胞株的条件培养基中成功分离和纯化了胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-line derived neurotrophic factor, GDNF),GDNF对多巴胺能神经元有特异性营养作用,是一种有效的多巴胺能神经营养因子[1]。GDNF可以减少培养的多巴胺能神经元的凋亡,增加多巴胺能神经元存活的数量及其对多巴胺的摄取,增大多巴胺能神经元的体积并促进其轴索的延伸。体内实验显示:将胚鼠的腹侧中脑植入眼前房并同时给予GDNF注射,可使多巴胺能神经元胞体和纤维数量明显增加,提示GDNF对发育中的多巴胺能神经元有促进存活和分化的作用。另一方面,GDNF还能预防体内多巴胺能神经元的退行性病变,经大鼠试验研究表明:大鼠纹状体内注射6羟基多巴胺(6-OHDA)造成黑质及纹状体内多巴胺能神经元退行性病变,如果预先向大鼠黑质内注射GDNF,均可对抗6-OHDA造成的损伤,阻止多巴胺能神经元的死亡[5]。最近体外培养研究表明,人的胚胎和恒河猴的胚胎在骨髓基质细胞上诱导成神经球,再加入GDNF等营养因子,能分化出大量的DA能神经元[6],说明GDNF不仅对DA能神经元具有营养支持和保护作用,而且还能促进神经前体细胞向DA能神经元分化。本实验研究发现哌甲酯能促进SHR大鼠纹状体GDNFmNRA的基因表达,增加纹状体的DA含量,这可能也是哌甲酯治疗ADHD的作用机制之一。

    人参皂苷Rg1是人参皂苷单体之一,而人参皂苷是人参、三七和绞股蓝等多种中药的主要药理成分,目前已发现其具有抗疲劳、抗衰老、抗癌、降血脂、增强记忆力、提高免疫力等作用。近年来,人参皂苷Rg1的神经营养和神经保护作用越来越受到人们的关注,研究发现人参皂苷Rg1对中脑 DA能神经元具有保护作用,其作用机制与抗凋亡、抗氧化应激有关[7]。当外周神经受损伤时,而对外周神经起保护作用,对多巴胺能神经元也有部分的神经营养和神经保护作用[8],离体细胞实验亦揭示人参皂苷Rg1可以抵抗神经毒素对中脑DA能神经元的毒性作用[9]。实验证明,人参皂苷Rgl能明显影响中枢神经系统,特别在易化记忆过程方面有很好的作用,能对神经细胞起保护作用,抑制钙超载,促进蛋白质合成,稳定神经细胞膜,稳定突触结构。 Rg1的功效和结构能够增加神经的可塑性,可以增进普通成年小鼠和脑缺血沙鼠海马齿状回神经祖细胞的增殖和分化,从而改善学习和记忆能力[10]。本实验研究发现人参皂苷Rg1同哌甲酯一样能增强SHR大鼠纹状体GDNFmNRA的基因表达和提高纹状体的DA含量,这为今后临床上使用人参皂苷Rg1治疗ADHD提供了理论依据。

    参考文献

    [1] Reis RA,Cabral de Silra MC,Loureiro dos Santos NE,et al Sympathetic neuronal surviral induced by retinal trophic factors[J].J Neurobiol,2002,50(1):13-23.

    [2] Davids E,Zhang K,Tarazi FI,et al.Animal models of attention-deficit hyperactivity disorder[J].Brain Res Brain Res Rev,2003,42(1):1-21.

    [3] Krause K H,Dresel S H,Krause J,et al.The dopamine transporter and neuroimaging in attention deficit hyperacitivity disorder[J].Neurosci Biobehav Rev,2003,27(7):605-613.

    [4] Lin LF,Deherty DH,Life jD,et al .GDNF:A glial cell line-derived neurotrophic factor for midbrain dopamine rigic neurons[J].Science,1993,260(5111):1130-1132.

    [5] Aoi M,Date I,Tomita S,et al ......

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