尿激酶对实验性重症急性胰腺炎并发肾损害时炎性介质的影响(1)
 |
急性胰腺炎(AP)是较常见的急腹症，预后差。存在胰腺坏死的重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)的死亡率高达14%～35%以上[1，2]。本研究以Wistar大鼠SAP模型为基础，通过观察血栓素A2(TXA2)、前列环素I2(PGI2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的动态改变以及肾脏组织病理改变，探讨尿激酶对SAP肾损害时炎性介质的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 实验动物与模型制备：雄性Wistar大鼠192只(中国医科大学附属二院动物实验中心提供)，体重220～280 g，随机分为3组，对照组(C)，胰腺炎组(P)，治疗组(T)；各组又按模型制备后2、6、12、24小时分为4组，每组16只，用于抽取血样及组织学观察。动物实验前12小时禁食不禁水，10%水合氯醛腹腔注射3 ml/kg，左颈部切口，分离颈外静脉置入静脉营养管，于颈背部引出，并固定接补液泵，2 ml/h给予平衡液，缝合切口。再于上腹部正中切口进腹，4号头皮静脉针于十二指肠乳头对侧缘穿刺，拉细的硬膜外导管逆行穿入胰胆管末端，动脉夹分别于十二指肠端和肝门部夹闭胰胆管，逆行注入5%牛磺胆酸钠(美国Sigma公司)，注射时间为1分钟，保持5分钟，去除动脉夹，拔除穿刺管，胰腺出现充血、水肿、局灶性坏死后，进行后续实验。对照组开腹后仅翻动十二指肠后关腹。治疗组在模型制成后30分钟给予尿激酶25 U/g，静脉注射。
, 百拇医药
1.1.2 标本收集：大鼠模型制成后在2、6、12、24小时分批麻醉由下腔静脉抽血3 ml，并用5% ETDA-Na2抗凝，3 000 r/min离心，取上清液，放置-70℃保存，同时取左肾放入10%福尔马林中保存。
1.2 检测项目
1.2.1 血浆TXA2/PGI2的测定和血浆TNF-α的测定：TXA2生物半衰期约30分钟，迅速代谢为无活性的TXB2，PGI2生物半衰期约3分钟，迅速代谢为6-酮-前列环素F1α(6-Keto-PGF1α)，难以直接测定TXA2/PGI2。目前国内外均以放射免疫法测TXB2/6-Keto-PGF1α作为判断其浓度的指标。血浆TNF-α的测定：以放射免疫法测定。TXB2试剂盒、6-Keto-PGF1α试剂盒、TNF-α试剂盒均购自301医院东亚免疫技术研究所。
1.2.2 肾脏组织学检查：肾脏组织经石蜡包埋，切成4 μm厚，切片行HE染色后，利用盲法由病理医师在光镜下观察病理学改变，分级标准按文献报道[3]。
, 百拇医药
2.3 数据处理:采用SSPS11.5统计软件包对TNF-α、TXA2/PGI2 水平的计量资料进行Post Hoc检验；肾脏组织损伤程度的等级资料用非参数统计法的Kruskal-Wallis test检验。相关分析：计量资料与等级资料间采用Spearman相关分析。
2 结果
2.1 TXA2(TXB2)水平：见表1。
2.4 病理学检查：C组大鼠肾脏组织未见明显病理变化或偶有肾小管上皮浊肿，但细胞界限清楚，管腔存在，间质无淤血水肿；P组大鼠有肾小球淤血，肾小管上皮明显变性，细胞界限模糊管腔变窄或闭塞，可见少量的片状肾小管上皮坏死；T组肾小球少量淤血，肾小管上皮浊肿，偶有变性，管腔变窄减轻，很少片状肾小管坏死。与C组相比，P组肾脏组织病理有明显改变(P<0.01),但T组病理改变与同时段P组相比改善较明显(P<0.05)。
2.5 相关分析：Spearman相关分析显示，P组血清TXA2/PGI2、TNF-α与肾脏组织损伤程度间均呈高度正相关(r=0.398，0.476。P
[ 下 页 ], http://www.100md.com(史景峰 刘金钢 蔡振刚 赵海鹰 杨福全 余 云)