HPLC测定骨筋丸片中龙胆苦苷的含量
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【摘要】目的：建立骨筋丸片定量检测方法。方法：高效液相色谱法(HPLC)。C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水(1∶3)，流速1.0 ml/min，检测波长254 nm。结果:龙胆苦苷进样量0.05～0.80 μg与峰面积呈良好的线性关系(r＝0.9997)，回收率为98.85%，RSD为1.16%。结论:该法操作简便、准确，可作为骨筋丸片中的含量测定方法。
【关键词】骨筋丸片；龙胆苦苷；高效液相色谱法
文章编号：1009-5519(2007)17-2549-02 中图分类号：R28 文献标识码：A
Determination of the content of gentiopicrin in gujinwan tablets by HPLC
REN Yi-sheng1，YANG Zhen-wei2 ，PENG Pei-pei，et al.
, 百拇医药
(1.Nanjing Encephalopathic Hospital,Nanjing 210029,China;2.Nanjing Jinghua Bioengineering Co.Ltd，Nanjing 210029，China)
【Abstract】Objective：To establish the quality control method of gujinwan tablets. Methods：Using RP-HPLC with Hypersil C18 columm(150 mm×4.6 mm，5 μm),the mobile phase consisted of methanol-water(1:3)with 1 ml/min of flow rate，and the detection wavelength was at 254 nm.Results：Gentiopicrin showed good linear relationship in the range of 0.05~0.80 μg.The recovery rate was 98.85% and RSD was 1.16%.Conclusion：This method is simple and accurate，and can be used for content determination of ggujinwan tablets.
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【Key words】Gujinwan tablet；Gentiopicrin；HPLC
骨筋丸片主要由秦艽、白芍、三七、马钱子等14味中药制成的片剂，具有活血化瘀、舒筋通络、祛风止痛的功效。用于治疗肥大性脊椎炎、颈椎病、跟骨刺、增生性关节炎、大骨节病等。收藏于卫生部药品标准《中药成方制剂》第13册。国家标准中只有几个定性鉴别的项目，无含量测定的规定，其药品质量不易控制，故急需修改其标准。骨筋丸片处方中君药为秦艽和马钱子，查阅文献报道，骨筋丸片的含量测定只有一篇刘同祥[1]P-HPLC测定骨筋丸片中士的宁含量》，检测的是马钱子，而另一个君药秦艽，其主要成分龙胆苦苷的含量在骨筋丸片质量标准中未有控制。为了适应现代生产的要求，我们对另一君药秦艽的含量测定方法进行了详细的质量研究，3批样品的检测结果表明，本方法具有操作简便、分析快速、灵敏度高、准确性好等优点，可作为骨筋丸片质量标准制定时的参考。
1 仪器与试药
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岛津LC-10AT高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；江申色谱工作站，色谱柱: Kromasil 100-5 C18 (150 mm×4.6 mm， 5 μm)预柱；METTLER AE-240电子天平(瑞士)。
龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号为110770-200409，供含量测定用)；骨筋丸片:黑龙江省中医研究院制药厂提供，每片0.3g，批号为20040102，20050106，20050402。
甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：Kromasil 100-5 C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)预柱；流动相：甲醇-水(1∶3)，流速1.0 ml/min，柱温25 ℃，检测波长254 nm。数据处理定量方法:外标峰面积法。理论板数按龙胆苦苷峰计算不低于3000。
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3 溶液的制备
3.1 对照品溶液：精密称取龙胆苦苷对照品适量，用甲醇制成100.0 μg/ml的储备液。分别精密量取储备液0.25，0.5，1.0，2.0，4.0 ml，各置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别制成2.5，5.0，10.0，20.0，40.0 μg/ml的溶液，即得。
3.2 供试品溶液：取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，取0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加水适量，超声处理20分钟，加水至刻度，取上清液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取滤液，即得。
4 方法与结果
4.1 线性关系考察：分别精密吸取各浓度龙胆苦苷对照品溶液20 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归及相关系数。结果表明：龙胆苦苷在2.5～40.0 μg/ml范围内，峰面积积分值与进样量成线性关系。其线性回归方程为:
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Y=2.4383×104X+5.2187×104r=0.9997
4.2 精密度试验：精密吸取上述对照品溶液(20.0 μg/ml )20 μl，连续进样6次，记录峰面积，计算结果峰面积的RSD为0.77%，表明仪器的精密度良好。
4.3 阴性试验：按样品工艺制备缺龙胆苦苷的阴性样品，照“3.2”项下操作，制备阴性对照溶液。进样20 μL测定，结果阴性对照样品在与龙胆苦苷对照溶液及样品中龙胆苦苷相应保留时间处无吸收峰出现。见图1。
4.4 重复性和稳定性试验：取同批样品5份，按样品测定方法操作，进样20 μl，结果RSD为0.98%。取其中1份供试品溶液于0、2、4、8、12、24小时测定，结果24小时内峰面积积分值基本不变，RSD为2.3%。
4.5 加样回收率试验：分别精密移取对照品溶液(100.0 μg/ml)1.6 ml，加入到6份(每份约0.5 g)精密称定的制剂粉末中，照“3.2”项下方法制备溶液，测定含量，计算加样回收率。结果见表1。平均回收率(n=6)为98.85%，RSD为1.16%。
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4.6 样品测定：取骨筋丸片，同法制备供试品溶液并测定，以面积归一化法计算含量。结果见表2。
5 讨论
5.1 在本文色谱条件下，龙胆苦苷有足够大的峰值，基线噪音小，制剂中龙胆苦苷与其他组分间有较好的分离度，样品龙胆苦苷的保留时间与对照品龙胆苦苷保留时间一致，阴性液杂质峰无干扰。
5.2 本方法无需烦琐的样品处理步骤，分析时间短，是一种行之有效的实用方法。具有操作简单、快速，结果准确，精密度高等优点。
5.3 本法在实验中采用甲醇-水系统分析，其配制方法简单，分离效果较好，针对中药的特殊性，在色谱柱前加装了预柱，进一步纯化了样品，且保护了色谱柱，提高了分析方法的准确性。
5.4 本试验可以为骨筋丸片的质量标准的修订提供依据，对其他以秦艽为主要成分的中药制剂的质量控制也有一定的参考价值。
参考文献：
[1] 刘同祥，周刚，陈富君，等.RP-HPLC测定骨筋丸片中士的宁含量[J].中国中药杂志，2006，31(3)：258.
收稿日期：2007-05-11 修回日期：2007-05-30, 百拇医药(任义胜 杨振伟 彭培培 李守忠)