猪血中高纯度血红素的提取工艺(2)
1.2.7 血红素含量与纯度测定:以0.1 mol/L NaOH溶解血红素标准样品和提取样品,调整至适宜浓度,参考文献[5]于波长385 nm处测定吸光度值,计算样品中血红素的含量及其纯度。
2 结果
2.1 溶血方法的比较
2.1.1 水溶胀溶血法:在0~4℃下,加入不同体积的去离子水,比较水与红细胞不同比例(V/V)在搅拌不同时间的溶血效果,结果见表1。
2.1.2 乙醇溶血法:取洗净的红细胞加入不同体积倍数的无水乙醇,测定红细胞溶血效果。结果无水乙醇的量越多,溶血效果越好;在无水乙醇量20%~30%之间,溶血率明显增加;当乙醇量为30%时,溶血率达95%以上;乙醇量在35%以上,细胞全部破碎。这是因为一定浓度的乙醇可使红细胞细胞膜中蛋白质变性、溶解脂类成分而失去细胞膜结构,从而导致红细胞破碎。
2.1.3 超声波溶血法:取洗净的红细胞或加入0.5体积去离子水,在超声波不同功率下处理10分钟,观察溶血效果。结果见图1。
综合三种溶血方法的优缺点,本研究确立采取超声波溶血法。超声波溶血条件为取红血球加入等体积去离子水,以超声波400 W功率工用10分钟,溶血率达到100%。
2.2 酸性丙酮溶液中浓盐酸与丙酮体积比的确立:由于酸性丙酮的pH值不易测定 ......
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