乙型肝炎病毒血清标志物与HBV-DNA含量间的关系探讨
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【摘要】目的：探讨乙型肝炎病毒血清标志物与HBV-DNA含量间的关系，为临床诊断、治疗、预防提供参考。方法：运用酶联免疫吸附法及实时荧光定量PCR检测患者的乙肝标志物及HBV-DNA含量，用统计学方法对本院及国内近5年医学期刑的相关报道的资料进行汇总、分析。结果：检测的775例患者中有331例为大三阳，92.5%检出HBV-DNA，含量为(7.49±1.12)考贝/ml，HBcAb检出率95.23%>HBsAg 85.94%，几乎血清标志物的各种组合均有HBV-DNA检出。结论：(1)血清学标志物检测为大三阳，基本可以确定有HBV复制；(2)对于献血员筛选，有条件的地区最好同时进行乙肝两对半及HBV-DNA检测；(3)对于HBV感染者的复诊，尤其是为了观察药物疗效的患者，只需进行HBV-DNA检测。
【关键词】乙型肝炎病毒；血清标志物；聚合酶链反应
文章编号：1009-5519(2008)05-0676-02 中图分类号：R446 文献标识码：A
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自上世纪60年代发现乙型肝炎以来，肝炎的检测方法已从当初的生化检测、免疫学检测向基因检测方向发展。随着对肝炎研究的不断深入、治疗方案的改变、新药的应用，乙肝各项检测结果的格局也会有一些新的变化，按照现代循证医学的方法观点，我们既要对新的检测方法进行比较分析，也有必要对已有检测方法进行重新评估[1]。以下是我们对2004年6月～2006年8月来我院同步进行乙肝标志物及HBV-DNA含量检测的775例患者检测结果的统计分析，以及近5年国内医学期刊乙型肝炎病毒血清标志物和HBV-DNA相关报道的资料汇总，现报道如下：
1材料和方法
1.1材料
1.1.1标本来源：2004年6月～2006年8月间同步进行乙肝标志物及HBV-DNA含量检测的775例我院门诊和住院病人。另选自近5年国内公开发行的医学期刊，如《中华检验医学杂志》、《临床检验杂志》、《中华肝脏病杂志》等杂志，在查阅的乙肝病毒血清标志物和HBV-DNA相关的6篇文章中，资料分类相近的进行资料汇总。
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1.1.2试剂：乙肝标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)检测使用上海荣盛科技有限公司提供的ELISA检测试剂合，HBV-DNA含量检测使用中山大学达安基因股份有限公司提供的乙型肝炎核酸扩增荧光检测试剂合。
1.1.3仪器：ELISA检测使用Biocellht3洗板机洗板，Biocellht3酶标仪测定结果；HBV-DNA检测使用PE5700荧光定量PCR检测仪。
1.2方法
1.2.1实验方法：乙肝标志物检测采用酶联免疫吸附方法(ELISA)，HBV-DNA含量检测采用实时荧光定量PCR方法。
1.2.2统计方法：数据处理采用Microsoft Excel2002，运用χ2检验及Fisher确切概率法进行显著性差异检验[2]。
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2结果
2.1775例乙型肝炎病毒血清标志物各种模式构成及HBV-DNA阳性数和含量见表1，HBV-DNA含量测定范围为1×103～1.5×109考贝/ml。
2.2乙型肝炎病毒各血清标志物HBV-DNA阳性数和含量见表2。
2.3国内医学期刊6篇乙型肝炎病毒血清标志物和HBV-DNA相关报道同我院的资料情况见表3。
3讨论
表1可以看到大三阳(HBsAg，HBeAg，HBcAb)、双阳(HBsAg，HBcAb)及小三阳(HBsAg，HBeAb，HBcAb)患者的HBV-DNA阳性率分别达92%、50%、33%，与有关报道基本相似[3][5]，HBV-DNA平均含量分别为7.5、5.6、5.5，反应出HBV复制活跃程度依次递减；HBV-DNA阳性率均基本相同(χ2=0.011,P>0.05),而小三阳则有较大差异(χ2=7.22,P<0.01),提示感染前期HBV复制水平较高；HBsAb阳性的各组中，均有HBV-DNA阳性，说明HBV并未完全停止复制，应引起注意；在13例单项HBcAb竟无1例DNA检出，提示HBcAb可能有一定的保护作用。
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从表2中可以看到各血清学标志物的HBV复制活跃程度依次递减为HBeAg、HBsAg、HBcAb、HBeAb、HBsAb与有关文献报道相似[6]，而HBcAb阳性率达95.2%>HBsAg85.9%，且DNA检出率(DNA%)与DNA含量不成正比，不论是表1还是表2，其机理有待于进一步研究。
另外，我们对各血清学标志物间的相关度进行了计算，各血清学标志物之间及和某些组合间的相关度相当高，如HBeAg阳性，则HBsAg与HBcAb均100%阳性；HBsAb阳性，则HBsAg、HBeAg、HBcAbIgM皆99%阴性，还有HBsAg对HBcAb(+)、HBeAb对HBsAg(+)及HBcAb(+)、HBcAb对HBsAg(+)均有95%以上的相关度，对探讨发病机理及解释检验结果均有帮助。
在表3中，除大三阳外，小三阳及双阳的DNA阳性比例均有较大差异(>20%)，经Fisher确切概率法计算，大三阳的DNA定量各组间P>0.05，差异无显著性；小三阳及双阳的各组差异均有显著性(χ2检验)；这可能与PCR试剂的引物序列差异导致灵敏度高低不同相关，希望国家有关部门尽快统一试剂标准，提高各地检测结果的可比性。
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通过以上比较分析，我们初步可以得出以下结论：(1)对于诊断而言，如果血清学标志物检测为大三阳，基本可以确定有HBV复制，可以不进行DNA检测。(2)由于HBcAb阳性率大于HBsAg，可提示部分既往感染的患者，因此对于献血员筛选，有条件的地区最好同时进行乙肝两对半及HBV-DNA检测(至少应加测HBcAb)，这样既能发现HBV感染窗口期，又能避免某些HBV低水平复制的DNA漏检，以便最大限度地减少输血后肝炎的发生。(3)对于HBV感染者的复诊，尤其是为了观察药物疗效的患者，只需进行HBV-DNA检测，因为大量的资料显示，此时血清学标志物的各种模式均有HBV-DNA检出，血清学标志物的检测不能确定HBV有无复制。
随着检测试剂质量的提高、操作者技术的熟练以及新药的应用和治疗方案的改变，乙肝各血清学标志物检测结果的格局也会有一些变化，本文统计的775例中，某些血清学标志物的阳性组合(如HBsAg同HBeAg及HBsAg同HBeAb)就未出现，与某些文献报道不尽相同[3,4]，有待于在今后工作中进一步观察。
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参考文献：
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收稿日期：2007-12-11, http://www.100md.com(王志平 田 峰)