IMP型金属β-内酰胺酶的研究进展(2)
2 IMP型MBLs的检测方法
目前CLSI关于MBLs的表型检测尚无推荐方法。主要包括纸片扩散法、微量稀释法和E试验。这些方法各有优缺点：纸片扩散法操作简单、快速，结果相对容易判断，灵敏度和特异度较高，但药敏纸片及纸片之间的距离未标准化；微量稀释法可直接测定最低抑菌浓度(MIC)值，结果容易判断，但劳动强度大；E试验操作简单，结果容易判断，灵敏度、特异度也较高，但不能检测出低水平耐药菌株，且成本较高。上述表型试验的原理是金属螯合剂可与酶活性中心的锌离子结合，从而抑制MBLs的活性。然而，部分产IMP酶的细菌，如大多数肠杆菌科细菌表现为对碳青霉烯类抗生素中介或敏感，因而当用美罗培南或亚胺培南对产IMP酶的肠杆菌科细菌进行表型检测时，就会出现假阴性。等电聚焦电泳(IEF)也可用于某些β-内酰胺酶的检测，它主要利用各种酶的表面电荷不同来测定其PI值，可以提供未知MBLs的PI值。但由于部分MBLs的PI值相近，而在结构上相差巨大，故IEF存在一定的局限性。基因型检测方法主要包括PCR法、DNA探针法和测序法，它们都是从基因水平上进行检测和分析，灵敏度和特异度都较高。PCR法需要特定的引物，DNA探针法需要特定的探针，两者都不能区分各亚型，也不能用于发现新的基因型。最近Mendes等[11]用实时PCR法检测MBLs基因，结果显示该方法能快速(2小时)检测出所有含MBLs基因菌株，其结果与基因测序完全一致，但其同样只能用于已知基因的鉴定。测序法是目前公认的IMP型MBLs基因分型的金标准，但该方法操作步骤烦琐，所需时间较长，费用高，需要昂贵的仪器，因此不宜作为一种筛查的方法，可用于IMP型MBLs的分子流行病学监测。脉冲场凝胶电泳(PFGE)的原理大致为:将细菌包埋于琼脂块中，用适当的内切酶在原位对细菌染色体进行酶切，酶切片段在特定的电泳系统中通过电场方向不断交替变换及合适的脉冲时间等条件而得到分离。PFGE可用于了解各型IMP酶的同源性，也可用于分子流行病学研究，其重复性好，分辨率强。但同样存在操作步骤繁琐、费用高及需要特殊仪器等缺点，而不能用于常规检测。
, 百拇医药
3 产IMP型MBLs菌株引起感染的治疗措施
IMP型MBLs能水解除单环类抗生素以外的几乎所有β-内酰胺类抗生素；加上blaIMP基因常与编码对其他抗生素耐药的基因，如氨基糖甙类耐药基因，共同位于整合子上；而且IMP阳性细菌如铜绿假单胞菌、不动杆菌及部分肠杆菌科细菌等，往往同时存在其他耐药机制，如产生头孢菌素酶、药物主动外排和外膜蛋白丢失或减少等，因而这些细菌通常表现为对β-内酰胺类、氨基糖甙类及氟喹诺酮类抗生素耐药。产IMP型MBLs菌株引起人类感染的报道已屡见不鲜，但目前尚无合适的治疗方案。Bellais等[12]设计动物模型，用抗生素治疗产VIM-2的铜绿假单胞菌感染所致的小鼠肺炎研究中发现，大剂量氨曲南对治疗有效。但关于产IMP酶细菌引起的感染及应用于人类感染的研究还未见报道。金属螯合剂在体外可以抑制MBLs的活性，但尚不能应用于人体。
目前多粘菌素类抗生素被认为是治疗医院感染多重耐药革兰阴性细菌的最后防线。最近许多报道证实，多粘菌素类抗生素在治疗多重耐药革兰阴性细菌所致严重的医院感染方面安全、有效，同时发现其肾毒性及神经毒性并不像以前文献报道的严重。目前关于多粘菌素类抗生素的有效剂量、疗程、临床适应症及安全性亟待进一步研究。
, 百拇医药
参考文献：
[1] Yan JJ，Ko WC，Tsai SH，et al.Outbreak of infection with multidrug-resistant klebsiella pneumoniae carrying blaIMP-8 in a university medicalcenter in taiwan[J]. Journal of Clinical Microbiology，2001，39：4433.
[2] Arakawa Y，Murakami M，Suzuki K，et al.A novel integron-like ele-ment carrying the metallo-β-lactamasegeneblaIMP[J]. AntimicrobAgents Chemother，1995，39:1612.
[3] Yano H，Kuga A，Okamoto R，et al.Plasmid-encoded metallo-lacta-mase(IMP-6) conferring resistance to carbapenems，especially meropenem[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2001，45:1343.
, 百拇医药
[4] Houang E，Chu YW，Lo WS，et al.Epidemiology of rifampin ADP-ri-bosyltransferase (arr-2)and metallo-?茁-lactamase (blaIMP-4) gene cassettes in class 1 integrons inacinetobacterstrains isolated from blood cultures in 1997 to 2000[J]. Antimicrobial Agents and Chemo-therapy，2003，47:1382.
[5] Da Silva GJ，Correia M，Vital C，et al.Molecular characterization of bla(IMP-5)， a new integron -borne metallo-beta-lactamase gene from an acinetobacter baumannii nosocomial isolate in portugal[J]. FEMS Microbiol Lett，2002，24:215(1):33.
, 百拇医药
[6] Gibb AP，Tribuddharat C，Moore RA，et al.Nosocomial outbreak of carbapenem-resistant pseudomonas aeruginosa with a new blaIMP Allele，blaIMP-7[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2002，46:255.
[7] Riccio ML，Franceschini N，Boschi L，et al.Characterization of the metallo-lactamase determinant of acinetobacter baumannii AC-54/97 reveals the existence of blaIMP allelicvariantscarried by gene cassettes of different phylogeny[J].Antimicrobial Agents and Chemo-therapy，2000，44：1229., http://www.100md.com(胡柯峰 张大志)
目前CLSI关于MBLs的表型检测尚无推荐方法。主要包括纸片扩散法、微量稀释法和E试验。这些方法各有优缺点：纸片扩散法操作简单、快速，结果相对容易判断，灵敏度和特异度较高，但药敏纸片及纸片之间的距离未标准化；微量稀释法可直接测定最低抑菌浓度(MIC)值，结果容易判断，但劳动强度大；E试验操作简单，结果容易判断，灵敏度、特异度也较高，但不能检测出低水平耐药菌株，且成本较高。上述表型试验的原理是金属螯合剂可与酶活性中心的锌离子结合，从而抑制MBLs的活性。然而，部分产IMP酶的细菌，如大多数肠杆菌科细菌表现为对碳青霉烯类抗生素中介或敏感，因而当用美罗培南或亚胺培南对产IMP酶的肠杆菌科细菌进行表型检测时，就会出现假阴性。等电聚焦电泳(IEF)也可用于某些β-内酰胺酶的检测，它主要利用各种酶的表面电荷不同来测定其PI值，可以提供未知MBLs的PI值。但由于部分MBLs的PI值相近，而在结构上相差巨大，故IEF存在一定的局限性。基因型检测方法主要包括PCR法、DNA探针法和测序法，它们都是从基因水平上进行检测和分析，灵敏度和特异度都较高。PCR法需要特定的引物，DNA探针法需要特定的探针，两者都不能区分各亚型，也不能用于发现新的基因型。最近Mendes等[11]用实时PCR法检测MBLs基因，结果显示该方法能快速(2小时)检测出所有含MBLs基因菌株，其结果与基因测序完全一致，但其同样只能用于已知基因的鉴定。测序法是目前公认的IMP型MBLs基因分型的金标准，但该方法操作步骤烦琐，所需时间较长，费用高，需要昂贵的仪器，因此不宜作为一种筛查的方法，可用于IMP型MBLs的分子流行病学监测。脉冲场凝胶电泳(PFGE)的原理大致为:将细菌包埋于琼脂块中，用适当的内切酶在原位对细菌染色体进行酶切，酶切片段在特定的电泳系统中通过电场方向不断交替变换及合适的脉冲时间等条件而得到分离。PFGE可用于了解各型IMP酶的同源性，也可用于分子流行病学研究，其重复性好，分辨率强。但同样存在操作步骤繁琐、费用高及需要特殊仪器等缺点，而不能用于常规检测。
, 百拇医药
3 产IMP型MBLs菌株引起感染的治疗措施
IMP型MBLs能水解除单环类抗生素以外的几乎所有β-内酰胺类抗生素；加上blaIMP基因常与编码对其他抗生素耐药的基因，如氨基糖甙类耐药基因，共同位于整合子上；而且IMP阳性细菌如铜绿假单胞菌、不动杆菌及部分肠杆菌科细菌等，往往同时存在其他耐药机制，如产生头孢菌素酶、药物主动外排和外膜蛋白丢失或减少等，因而这些细菌通常表现为对β-内酰胺类、氨基糖甙类及氟喹诺酮类抗生素耐药。产IMP型MBLs菌株引起人类感染的报道已屡见不鲜，但目前尚无合适的治疗方案。Bellais等[12]设计动物模型，用抗生素治疗产VIM-2的铜绿假单胞菌感染所致的小鼠肺炎研究中发现，大剂量氨曲南对治疗有效。但关于产IMP酶细菌引起的感染及应用于人类感染的研究还未见报道。金属螯合剂在体外可以抑制MBLs的活性，但尚不能应用于人体。
目前多粘菌素类抗生素被认为是治疗医院感染多重耐药革兰阴性细菌的最后防线。最近许多报道证实，多粘菌素类抗生素在治疗多重耐药革兰阴性细菌所致严重的医院感染方面安全、有效，同时发现其肾毒性及神经毒性并不像以前文献报道的严重。目前关于多粘菌素类抗生素的有效剂量、疗程、临床适应症及安全性亟待进一步研究。
, 百拇医药
参考文献：
[1] Yan JJ，Ko WC，Tsai SH，et al.Outbreak of infection with multidrug-resistant klebsiella pneumoniae carrying blaIMP-8 in a university medicalcenter in taiwan[J]. Journal of Clinical Microbiology，2001，39：4433.
[2] Arakawa Y，Murakami M，Suzuki K，et al.A novel integron-like ele-ment carrying the metallo-β-lactamasegeneblaIMP[J]. AntimicrobAgents Chemother，1995，39:1612.
[3] Yano H，Kuga A，Okamoto R，et al.Plasmid-encoded metallo-lacta-mase(IMP-6) conferring resistance to carbapenems，especially meropenem[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2001，45:1343.
, 百拇医药
[4] Houang E，Chu YW，Lo WS，et al.Epidemiology of rifampin ADP-ri-bosyltransferase (arr-2)and metallo-?茁-lactamase (blaIMP-4) gene cassettes in class 1 integrons inacinetobacterstrains isolated from blood cultures in 1997 to 2000[J]. Antimicrobial Agents and Chemo-therapy，2003，47:1382.
[5] Da Silva GJ，Correia M，Vital C，et al.Molecular characterization of bla(IMP-5)， a new integron -borne metallo-beta-lactamase gene from an acinetobacter baumannii nosocomial isolate in portugal[J]. FEMS Microbiol Lett，2002，24:215(1):33.
, 百拇医药
[6] Gibb AP，Tribuddharat C，Moore RA，et al.Nosocomial outbreak of carbapenem-resistant pseudomonas aeruginosa with a new blaIMP Allele，blaIMP-7[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2002，46:255.
[7] Riccio ML，Franceschini N，Boschi L，et al.Characterization of the metallo-lactamase determinant of acinetobacter baumannii AC-54/97 reveals the existence of blaIMP allelicvariantscarried by gene cassettes of different phylogeny[J].Antimicrobial Agents and Chemo-therapy，2000，44：1229., http://www.100md.com(胡柯峰 张大志)