鲎试验测定丹参注射液中的细菌内毒素
【摘要】目的：检测丹参注射液中的细菌内毒素。方法：供试品干扰试验后，采用凝胶鲎试验对样品中的细菌内毒素进行检测。结果：3批丹参注射液稀释至60倍时对细菌内毒素的检测无干扰作用，所测样品的细菌内毒素含量均小于15 EU·ml-1。结论：所建立方法检查丹参注射液中的细菌内毒素可行。
【关键词】丹参注射液；细菌内毒素；鲎试验；干扰试验
文章编号：1009-5519(2008)16-2411-01 中图分类号：R28 文献标识码：A
输液导致热原超标是输液反应的主要原因[1]，近年来，采用细菌内毒素检查法代替家兔热原法检查药品、生物制品的致热物质越来越普遍。丹参注射液临床常用于冠心病胸闷，心绞痛等患者。《中国药典》2005年版尚未收载该品种。我们对3批样品进行了细菌内毒素的检测，以考察该方法的可行性。
1 实验部分
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1.1 药品与试剂：丹参注射液(四川三精升和制药有限公司， 10ml/支，批号：050303，060503，060505)，细菌内毒素标准品(中国药品生物制品检定所，批号：2004-2)，细菌内毒素检查用水(湛江海洋生物制品厂出品，批号：060306)，鲎试剂(湛江安度斯生物制品有限公司，λ=0.125 EU· ml-1，批号：0509160)，鲎试剂(湛江博康海洋生物有限公司，λ=0.125 EU·ml-1，批号： 0607061)。
1.2 方法与结果
1.2.1 鲎试剂灵敏度(λ)的复核：照《中国药典》[2]附录规定的方法，对实验所用的鲎试剂(TAL)进行灵敏度复核。结果鲎试剂的实测灵敏度均在0.5～2.0λ之间，符合规定。正式实验时取λ作为鲎试剂的灵敏度。
1.2.2 样品细菌内毒素限值(L)的确定：参照《中国药典》确定样品的细菌内毒素限值(L)，L=K·M-1，K为人用每千克体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，非放射性药品静脉途径给药时K值为5 EU·kg-1·h-1，M为人用每千克体重每小时给药最大剂量。丹参注射液成人最大剂量为20 ml·kg-1·h-1。综合生产、临床用药和检验的实际情况，将丹参注射液L值定为15 EU·ml-1。
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1.2.3 样品的干扰试验：用λ=0.125 EU·ml-1鲎试剂进行干扰试验时，对应样品的最大有效稀释倍数不能高于120倍。取1.2.1项下鲎试剂，分别对1批已检测细菌内毒素不超标的样品进行30倍、60倍和120倍稀释(批号：050303)，进行细菌内毒素干扰试验。样品在所述3种浓度下，对细菌内毒素检查均无干扰，故正式实验将样品稀释至60倍和120倍，并取2个厂家灵敏度为0.125 EU·ml-1的鲎试剂，参照有关文献[3]按灵敏度复核方法对样品稀释至60倍和120倍进行干扰实验，并计算以样品稀释液配制的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Et)及细菌内毒素检查用水配制的内毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Es)。
用丹参注射液60倍和120倍稀释液进行干扰试验时，其Et与相应的Es均在0.5～2.0之间，且Es在0.5～2.0λ之间，表明此时样品60倍和120倍稀释液对细菌内毒素检查均无干扰。
1.2.4 样品中细菌内毒素的常规检查取上述3批丹参注射液，稀释120倍，以λ=0.125 EU·ml-1的鲎试剂，按常规凝胶法进行细菌内毒素检查。结果上述3批丹参注射液120倍稀释液中的细菌内毒素含量均小于0.125 EU·ml-1，且对鲎试验检查无干扰作用。
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2 讨论
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测[2]，要求在适宜的温度、pH值及无干扰作用时鲎试剂能与微量的细菌内毒素反应形成凝胶，通过肉眼观察结果。在建立新药的细菌内毒素检查法时，首先要确定其细菌内毒素限值，还要求至少取3批样品，并应用2个厂家的鲎试剂进行细菌内毒素的干扰试验，确认样品在某一浓度下不会干扰细菌内毒素检查[2]，本品根据丹参注射液最大临床的规定剂量，确定其细菌内毒素限值为内毒素应小于15 EU·ml-1，并应用2个厂家鲎试剂对3批丹参注射液样品进行了细菌内毒素检查的干扰试验，结果当样品稀释120倍时，对鲎试验检查无干扰作用。从而证实可以建立该品种的细菌内毒素检查法，其细菌内毒素限值应小于15EU·ml-1。
参考文献：
[1] 孙佩芳，王春江，王建民，等.5年输液反应送检结果分析[J].中国医院药学杂志，2002，22(2)：122.
[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社，2005.附录79.
[3] 肖贵南，李瑾翡，吴招娣.鲎试验测定乙酰谷酰胺氯化钠注射液中的细菌内毒素[J].华西药学杂志，2006，21(40):390.
收稿日期：2008-04-29, http://www.100md.com(徐晓霞 刘 华 王红平)
【关键词】丹参注射液；细菌内毒素；鲎试验；干扰试验
文章编号：1009-5519(2008)16-2411-01 中图分类号：R28 文献标识码：A
输液导致热原超标是输液反应的主要原因[1]，近年来，采用细菌内毒素检查法代替家兔热原法检查药品、生物制品的致热物质越来越普遍。丹参注射液临床常用于冠心病胸闷，心绞痛等患者。《中国药典》2005年版尚未收载该品种。我们对3批样品进行了细菌内毒素的检测，以考察该方法的可行性。
1 实验部分
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1.1 药品与试剂：丹参注射液(四川三精升和制药有限公司， 10ml/支，批号：050303，060503，060505)，细菌内毒素标准品(中国药品生物制品检定所，批号：2004-2)，细菌内毒素检查用水(湛江海洋生物制品厂出品，批号：060306)，鲎试剂(湛江安度斯生物制品有限公司，λ=0.125 EU· ml-1，批号：0509160)，鲎试剂(湛江博康海洋生物有限公司，λ=0.125 EU·ml-1，批号： 0607061)。
1.2 方法与结果
1.2.1 鲎试剂灵敏度(λ)的复核：照《中国药典》[2]附录规定的方法，对实验所用的鲎试剂(TAL)进行灵敏度复核。结果鲎试剂的实测灵敏度均在0.5～2.0λ之间，符合规定。正式实验时取λ作为鲎试剂的灵敏度。
1.2.2 样品细菌内毒素限值(L)的确定：参照《中国药典》确定样品的细菌内毒素限值(L)，L=K·M-1，K为人用每千克体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，非放射性药品静脉途径给药时K值为5 EU·kg-1·h-1，M为人用每千克体重每小时给药最大剂量。丹参注射液成人最大剂量为20 ml·kg-1·h-1。综合生产、临床用药和检验的实际情况，将丹参注射液L值定为15 EU·ml-1。
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1.2.3 样品的干扰试验：用λ=0.125 EU·ml-1鲎试剂进行干扰试验时，对应样品的最大有效稀释倍数不能高于120倍。取1.2.1项下鲎试剂，分别对1批已检测细菌内毒素不超标的样品进行30倍、60倍和120倍稀释(批号：050303)，进行细菌内毒素干扰试验。样品在所述3种浓度下，对细菌内毒素检查均无干扰，故正式实验将样品稀释至60倍和120倍，并取2个厂家灵敏度为0.125 EU·ml-1的鲎试剂，参照有关文献[3]按灵敏度复核方法对样品稀释至60倍和120倍进行干扰实验，并计算以样品稀释液配制的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Et)及细菌内毒素检查用水配制的内毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Es)。
用丹参注射液60倍和120倍稀释液进行干扰试验时，其Et与相应的Es均在0.5～2.0之间，且Es在0.5～2.0λ之间，表明此时样品60倍和120倍稀释液对细菌内毒素检查均无干扰。
1.2.4 样品中细菌内毒素的常规检查取上述3批丹参注射液，稀释120倍，以λ=0.125 EU·ml-1的鲎试剂，按常规凝胶法进行细菌内毒素检查。结果上述3批丹参注射液120倍稀释液中的细菌内毒素含量均小于0.125 EU·ml-1，且对鲎试验检查无干扰作用。
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2 讨论
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测[2]，要求在适宜的温度、pH值及无干扰作用时鲎试剂能与微量的细菌内毒素反应形成凝胶，通过肉眼观察结果。在建立新药的细菌内毒素检查法时，首先要确定其细菌内毒素限值，还要求至少取3批样品，并应用2个厂家的鲎试剂进行细菌内毒素的干扰试验，确认样品在某一浓度下不会干扰细菌内毒素检查[2]，本品根据丹参注射液最大临床的规定剂量，确定其细菌内毒素限值为内毒素应小于15 EU·ml-1，并应用2个厂家鲎试剂对3批丹参注射液样品进行了细菌内毒素检查的干扰试验，结果当样品稀释120倍时，对鲎试验检查无干扰作用。从而证实可以建立该品种的细菌内毒素检查法，其细菌内毒素限值应小于15EU·ml-1。
参考文献：
[1] 孙佩芳，王春江，王建民，等.5年输液反应送检结果分析[J].中国医院药学杂志，2002，22(2)：122.
[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社，2005.附录79.
[3] 肖贵南，李瑾翡，吴招娣.鲎试验测定乙酰谷酰胺氯化钠注射液中的细菌内毒素[J].华西药学杂志，2006，21(40):390.
收稿日期：2008-04-29, http://www.100md.com(徐晓霞 刘 华 王红平)