载EWVDV多模态纳米粒的相变及体外血栓靶向性研究*
微泡,探针,磁共振,1材料与方法,2结果,3讨论
周 君,徐 杰,张 瑜,刘 佳,郭大静(重庆医科大学附属第二医院放射科,重庆400010)动脉血栓严重威胁人类健康,可引起心肌梗死、缺血性脑卒中、肺栓塞等严重疾病,在世界范围内其发病率和病死率居高不下[1]。因此,早期准确诊断、及时治疗能挽救缺血坏死组织,减少并发症,降低病死率。近年来,分子影像学的发展促进了动脉血栓的早期诊断及个体化治疗。国内外已有大量靶向诊断血栓的分子探针[2-5],在此基础上,本研究旨在利用聚乳酸/羟基乙酸(PLGA)为载体,制备载血栓亲和性肽谷氨酸-色氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(EWVDV)的超声及磁共振相变型多模态分子探针,以期借助多模态分子影像技术从分子及细胞水平实现对血栓的早期精准诊断,为血栓性疾病的治疗及预后判断提供基础依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 光学显微镜(日本Olympus公司);激光粒径仪(Zeta SIZER 3000HS,英国Malvern公司);流式细胞仪(FSCS-Vantate SE,美国BD公司);红外仪(美国Fluke公司);超声仪(意大利Esaote公司);光声成像系统(Vevo Laser,加拿大 VisualSonics公司);3.0T磁共振扫描仪(荷兰Philips公司)。
1.1.2 试剂 羧基PLGA(配比75∶25,相对分子质量为8 000,济南岱罡生物材料有限公司);有机物可溶性Fe3O4纳米粒子(油酸表面修饰,美国Ocean NanoTech公司);全氟己烷(PFH,美国Elf Atochem公司);印度墨水(美国Amresco公司);GA修饰的EWVDV肽(上海吉尔生化有限公司);1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)、聚乙烯醇(PVA)及 DiI染色剂均购于美国Sigma公司;其他试剂均为国产分析纯。
1.2 多模态纳米粒的制备及表征
1.2.1 非靶向多模态纳米粒的制备 采用三步乳化法,首先取200 μL 10%印度墨水加入200 μL PFH,声振70 s(功率100 W)形成黑色乳液;将100 mg PLGA加入3 mL二氯甲烷,待其完全溶解后加入80 μL经油酸修饰的Fe3O4,振摇20 min,使其充分混合;然后倒入上述黑色乳液,声振70 s形成深灰色初乳;最后加入10 mL 4%PVA溶液,声振70 s,形成浅灰色乳液;加入20 mL 2%异丙醇,将上述溶液置于通风橱搅拌2 h ......
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