杨勤，杨德全，龚伟(1.重庆三峡医药高等专科学校，重庆404120；2.重庆市抗肿瘤天然药物工程技术研究中心，重庆404120)

    狼毒大戟是大戟科狼毒属植物的干燥根，性味辛、平，有大毒[1]。《神农本草经》记载其具有“主咳逆上气，破积聚，饮食，寒热，水气，恶疮，鼠瘘疽蚀，蛊毒”等功效。临床上已有大量报道证明狼毒大戟对肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤有独特疗效，但其抗癌机制尚未明确[2-4]。本研究通过检测狼毒大戟对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等方面的影响，探讨狼毒大戟抑制肝癌细胞上皮间质化(EMT)的机制，为进一步研发该药提供参考。现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系 人高转移肝癌细胞MHCC97H购于北纳创联。

    1.1.2 药物 狼毒大戟采自云南香格里拉，经大理大学张德全副教授鉴定为大戟科狼毒大戟的干燥根。

    1.1.3 试剂 DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)购于Hyclone公司。胎牛血清购于Lonsera公司。四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)，Transwell小室、Matrigel胶购于 Corning公司。抗人E-cadherin单抗(ab40772)和抗人Vimentin单抗(ab92547)购于 Abcam公司。β-actin购于 Genetex公司。辣根过氧化物酶标记抗兔免疫球蛋白G(IgG)购于中杉公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 人高转移肝癌细胞MHCC97H采用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM高糖培养基，37℃、5%CO2培养箱中培养，取对数生长期的细胞进行试验。

    1.2.2 狼毒大戟活性部位的提取分离 取干燥狼毒大戟生品200 g，粉碎，过60目筛，用95%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压浓缩为浸膏，得狼毒生品的总提取物。用少量水将浸膏分散，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，萃取多次至各有机相无色，合并萃取液，挥干溶剂得各极性部位石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇浸膏。分别称取狼毒大戟提取物1 g，加入DMSO使其完全溶解(体积分数小于0.1%)，定容至刻度，制成供试品母液 ......