张 鑫，黎 静，鲁 晴，黄华生，林毓君，唐春女，潘璐璐，莫书荣(广西医科大学生理教研室，广西南宁 530021)

    随着我国人口数量的不断增加，人口老龄化问题逐渐突出，因此衰老性疾病和亚健康的衰老性疾病等随之而来。抗衰老研究及如何预防和延缓年龄相关疾病的发生和发展将有利于提高人们的生活质量，减少其家庭的经济负担，已逐渐成为医学界关注的热点。衰老最先表现为皮肤衰老，皮肤是人体最大的器官，由表皮、真皮和皮下组织构成，其中真皮为皮肤提供各种营养物质，成纤维细胞是真皮的主要细胞组成，维系着皮肤正常的生理结构和功能[1]。衰老的皮肤在结构和功能上将发生改变[2-3]。因此，皮肤成纤维细胞衰老模型在研究衰老机制、表现及筛选延缓衰老药物起着重要作用。本研究旨在建立成纤维细胞(MSF)衰老模型，为开展皮肤衰老及老年相关疾病的研究提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 选取5～7 d昆明乳鼠，购自广西医科大学实验动物中心。

    1.1.2 主要试剂 高糖DMEM培养基(美国Gibco公司)、Ⅰ型胶原酶(美国Invitrogen公司)、β-半乳糖苷酶细胞衰老染色试剂盒(上海碧云天公司)、鼠抗Vimentin单克隆抗体(武汉博士德公司)、鼠抗Sirt1单克隆抗体(SANTA CRUZ公司)、逆转试剂盒(Thermo公司)、液体DAB酶底物显色试剂盒(福州迈新生物技术有限公司)。4，6-二脒基-苯基吲哚(DAPI)(Solarbio公司)

    1.2 方法

    1.2.1 MSF的培养 取5～7 d的昆明乳鼠，用75%乙醇浸泡消毒30 min，用消毒过的手术剪分离乳鼠的背部皮肤5 cm×3 cm，将分离下来的皮肤置于10 cm的培养皿中，用含1%青霉素-链霉素的去离水磷酸盐缓冲液(DPBS)清洗 2次，吸净DPBS，去除血管脂肪，用手术剪将皮肤组织剪碎并将组织碎块转移到15 mL离心管内 ......